试剂的制备丨艾美捷逆转录病毒定量试剂盒方案

Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆转录病毒定量试剂盒不涉及细胞感染；相反，它门测量纯化病毒或未纯化病毒的病毒核酸含量上清液样品（参见测试原理）。在未纯化的病毒上清液的情况下，试剂盒是特别适用于在转导步骤之测定上清液滴度。该套件有检测灵敏度限为1.5 X 109病毒颗粒（VP）/mL，足以满足中高滴度逆转录病毒样本。整个过程大约需要60分钟。每个试剂盒都提供足够的试剂执行20次测试。QuickTiter™ 逆转录病毒定量试剂盒提供了一种快速定量的有效系统病毒上清液和纯化病毒的逆转录病毒滴度。

Cell Biolabs艾美捷QuickTiter™ 逆转录病毒定量试剂盒测定原理：

1.核酸消化

2.病毒下拉

3.蛋白质变性和病毒基因组释放

4.定量

Cell Biolabs逆转录病毒定量试剂盒组件：

1. QuickTiter™ Solution A (Part No. 40020): One tube – 200 µL.

2. QuickTiter™ Retrovirus Solution B1 (Part No. 312001): One tube – 800 µL.

3. QuickTiter™ Retrovirus Solution B2 (Part No. 312002): One tube – 800 µL.

4. QuickTiter™ Solution C (2X) (Part No. 40023): Two tubes – 1.5 mL each

5. CyQuant® GR Dye (400X) (Part No. 105101): One tube – 50 µL.

6. QuickTiter™ Retrovirus RNA Standard (Part No. 312003): One tube – 500 µL containing 200

µg/mL retrovirus RNA Standard

存储：将所有套件组件储存在4ºC。

试剂的制备：

•1X快速滴定仪™ 解决方案C：准备1X快速滴定仪™ 通过稀释提供的2X溶液C在去离子水中贮存1:2。在室温下储存稀释溶液。

•1X CyQuant®GR染料：根据包括逆转录病毒RNA标准样品的测定数量。使用立即准备1X CyQuant®GR染料，将提供的400X原液在1X TE中稀释1:400。为了获得佳结果稀释溶液应在制备2小时后使用。

标准曲线的制备：

1. 创建200µg/mL、100µg/mL，50µg/mL和25µg/mL的逆转录病毒RNA标准，…0µg/mL（1:2系列稀释），标记9个微离心管#1至#9。

2.添加20µL 1X快速滴定仪™ 溶液C至2号管至9号管，转移20µL 200µg/mL快速滴定仪™ 逆转录病毒RNA标准品至1号管和2号管。充分混合2号管，转移20µL将混合物（100µg/mL）输送至下一管。重复8号管的步骤，并将9号管用作坯料。

3.将每种稀释液（包括空白）5µL转移至适用于荧光计的微量滴定板上。添加将95µL 1X CyQuant®GR染料注入含有5µL样品的每个孔中。其中荧光板读取器使用480/520nm滤光片组。

结果示例：

下图显示了典型的定量结果。应使用以下数据仅供参考。该数据不应用于解释实际结果。

图：逆转录病毒RNA标准曲线。快速滴定仪™ 逆转录病毒RNA标准按照上述说明稀释。荧光测量在SpectraMax Gemini XS荧光计（分子器件），带485/538 nm滤光片组和530 nm切断

来源：https://www.amyjet.com/products/VPK-120.shtml