去垢剂兼容型Bradford试剂盒

去垢剂兼容型Bradford试剂盒

Detergent-Compatible Bradford Assay Kit

货号：PD-Cde-1000

组分：1000毫升染色液一瓶，5 mg/ml BSA四支。

保存：4度避光，一年有效。-20度冷冻可长期保存。

在涉及蛋白组学的实验中，经常需要检测溶液中的蛋白质浓度。常用的蛋白定量的方法分为两大类：一类是铜还原法，原理是在碱性环境中利用肽键将二价铜还原为一价铜，间接反映蛋白质的数量，如双缩脲反应、改良Lowry法、BCA法等；另一类是染料结合法，原理是通过染料与蛋白质的结合，使溶液的光吸收峰发生改变，从而反应蛋白质的数量，最常用的染料是考马斯亮蓝G250（Bradford法），以及一些金属-染料复合物，如儿茶酚-钼酸复合物、邻苯三酚红-钼酸复合物等。

在蛋白质提取和蛋白电泳实验中，经常会用到还原剂和去垢剂（表面活性剂），上述蛋白定量方法往往与这些还原剂和去垢剂不兼容：还原剂对铜还原法有强烈干扰作用，即使在没有蛋白的情况下也能产生显色反应，无论是样品本身含有的抗坏血酸，或是缓冲液中含有的巯基乙醇、二硫苏糖醇（DTT）等，均能形成干扰；去垢剂则对染料结合法有强烈干扰作用，如SDS、Triton X100、Tween-20等，会与染料结合使溶液光吸收峰发生改变；高浓度的去垢剂也会对铜还原法产生干扰，但是在常用浓度下一般没有影响。这些还原剂和去垢剂在蛋白提取缓冲液和电泳相关缓冲液中很常见，传统上解决这些干扰的方法是通过蛋白沉淀法去除干扰成分，然后重悬蛋白进行浓度测定，其缺点在于显著增大了工作量，并且增加了实验误差。

Bradford法不受绝大部分样品中的化学物质的影响，也不受还原剂的影响，但是去垢剂可以造成强烈干扰。通过与染料结合，去垢剂抬高背景光吸收值，使得检测灵敏度和检测范围发生改变，甚至无法检测。本产品通过对Bradford法的改进，采用特殊配方，消除去垢剂的干扰，可兼容6% SDS、4% Tween20、2% Triton-X100、2% NP40，可耐受各种RIPA裂解液，对蛋白组学实验常用的各种缓冲液均可兼容。

 RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA裂解液(强)的主要去垢剂成分为1%Triton X-100，1% Sodium Deoxycholate，0.1% SDS；RIPA裂解液(中)的主要去垢剂成分为1% NP-40，0.5% Sodium Deoxycholate，0.1% SDS；RIPA裂解液(弱)的主要去垢剂成分为1% NP-40，0.25% Sodium Deoxycholate。即使样品含两倍浓度的RIPA裂解液（强）或RIPA裂解液(中)，本产品也可对BSA蛋白进行浓度检测，两倍浓度的RIPA裂解液仅仅引起背景OD值升高约40%。

 Bradford法蛋白定量的原理是在酸性环境中，蛋白质结合考马斯亮蓝G250染料，导致染料的最大光吸收峰发生位移，从红棕色形式（最大吸收峰 465nm）转化为蓝色形式（最大吸收峰 610nm）。这两种形式在 595nm 处光吸收差异最大，因此 595nm 是测定考马斯染料-蛋白复合物的蓝色的最佳波长。由于G250染料在结合蛋白前后的光吸收波谱有重叠，直接使用OD595线性拟合，得到的是一个直径很大的曲线，一般情况下可近似看作直线，在蛋白浓度跨度较大时会对线性拟合造成影响。使用OD595/OD470的比值则可以更好地拟合反应过程，得到的是一条直线，可提高检测灵敏度。本试剂盒对BSA蛋白的最大检测浓度可超过4 mg/ml，最低检测灵敏度为约30ug/ml，以检测样品体积5ul计算，即0.15ug的BSA蛋白。使用Bradford法蛋白定量时，被检测的肽或蛋白质的分子量须大于 3KD，低于此分子量的短肽和氨基酸无法检测。

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