做更真实的实验！艾美捷Caspase-1活性分析试剂盒方案

荧光标记的抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合的CAspa酶1,2。FLICA测量细胞内的凋亡过程，而不是副作用，如磷脂酰丝氨酸的翻转，并消除假阳性的发生率经常困扰着诸如附录V和TUNEL染色。FLICA也可用于测量焦下垂，一种高度炎症性的细胞程序性死亡。

Caspase已在从秀丽隐杆线虫到人类。哺乳动物半胱天冬酶在细胞凋亡和炎症中起着不同的作用。在凋亡中，效应半胱天冬酶（-3、-6和-7）负责蛋白水解导致细胞解体的裂解。Caspase触发（-8、-9，和-10）调节上游细胞凋亡。Caspase-1与焦下垂和炎症小体活性，并发挥关键作用持家酶将pro-IL-1ß蛋白转化为活性IL-1ß细胞因子。（使用FLICA套件#98、#9122和#9162检测caspase-1.）请注意，巨噬细胞和单核细胞具有已显示在激活后能快速分泌caspase-1，4，5。

与大多数其他蛋白酶一样，胱天蛋白酶的合成如下：

经历蛋白水解成熟的体具有相似特异性的酶自动催化或联6活性半胱天冬酶由两种大的（约20kD）和两种非共价结合形成两个异二聚体、四聚体活性胱天蛋白酶7-9。激活的半胱天冬酶通过识别3或4必须包含天冬氨酸（D）残基的氨基酸序列P1位置。该C-末端残基是裂解的目标每个FLICA探针都含有一个3或4被不同活化的胱天蛋白酶靶向的氨基酸序列。该目标序列夹在绿色荧光灯之间标签、羧基荧光素（FAM）和氟甲基酮（FMK）。

市面上常见的是检测细胞裂解液中的Caspase-1活性，更多研究者希望动态检测活细胞内的Caspase-1的活性，做更真实的实验！艾美捷推荐Immunochemistry Tech（ICT）的FLICA系列科研工具，进一步快速准确的进行Caspase-1活性分析。  

艾美捷Immunochemistry Caspase-1活性分析试剂盒原理：

FLICA试剂FAM-YVAD-FMK（Ex/Em = 488nm/530nm），是无细胞毒性的，细胞膜渗透抑制剂。进入每个细胞，并不可逆地与活化的caspase-1结合。任何未结合的FAM-YVAD-FMK-FLICA试剂扩散出细胞并被冲走。因此留在细胞内的绿色荧光直接体现了活性caspase-1酶活性的。荧光结果可通过荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪进行分析。

图：人单核细胞白血病THP-1细胞用ICT的绿色FAM-FLICA多胱天蛋白酶双重染色抑制剂试剂FAM-VAD-FMK（试剂盒#92）和蓝色DNA染色剂Hoechst 33342用1µM星孢菌素在37°C下孵育3小时以诱导细胞凋亡。然后在37°C下用FAM-VADMK标记细胞60分钟。清洗细胞，然后Hoechst加入染色剂并孵育5分钟。湿式安装准备好幻灯片，拍摄并叠加两张照片。使用条带检测Caspase活性（绿色）通滤波器（488nm激发；520nm发射）。原子能的Hoechst 33342的染色使用UV过滤器进行（365nm激发，480nm发射）。只有一个单元格这三个细胞是凋亡的（中间）用FLICA FAM-VAD-FMK测定半胱天冬酶活性。它也有很多Hoechst染色的亮蓝色斑点，表明DNA正在断裂，细胞开始死亡。这个缺乏绿色染色右下角的细胞表明它是活的（不是凋亡的）。上部左细胞坏死（无绿色，分散蓝色）。简短数据或Brian W.Lee博士，ICT。

艾美捷Caspase-1活性分析试剂盒：

Caspase Inhibitor Reagent (part#) Trial Standard

Poly Caspase FAM-VAD-FMK (637) 91 92

Caspase-1, 4, & 5 FAM-YVAD-FMK (655) 97 98

Caspase-1, 4, & 5 FAM-WEHD-FMK (6708) 9161 9162

Caspase-2 FAM-VDVAD-FMK (680) 918 919

Caspase-3/7 FAM-DEVD-FMK (653) 93 94

Caspase-6 FAM-VEID-FMK (654) 95 96

Caspase-8 FAM-LETD-FMK (656) 99 910

Caspase-9 FAM-LEHD-FMK (677) 912 913

Caspase-10 FAM-AEVD-FMK (682) 922 923

来源：https://www.amyjet.com/products/ICT-97.shtml