人乳铁蛋白ELISA试剂盒操作注意事项及步骤丨艾美捷方案

1.试剂应按标签说明书储存，使用恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质使用。

4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用充分混匀试剂盒里的各种成份及样品

6.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

人乳铁蛋白(LTF)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法：

1.血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗

3.细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

人乳铁蛋白(LTF)ELISA试剂盒操作步骤：

1.使用，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

艾美捷Kamiya人乳铁蛋白ELISA是一种高度灵敏的双位点酶联免疫测定（ELISA）人类生物样品中乳铁蛋白的测定。仅供研究使用。不用于诊断程序。

艾美捷Kamiya人乳铁蛋白ELISA试剂盒试剂制备校准仪：

将1.0 ml蒸馏水或去离子水加入冻干人乳铁蛋白校准仪中，并轻轻混合直至溶解。校准器现在的浓度为18.40µg/mL（重新配制的校准器应为如果打算将来使用，则立即冷冻）。需要准备人乳铁蛋白校准品使用立即（见下表）。在每一步之间充分混合。避免起泡。

艾美捷Kamiya人乳铁蛋白ELISA试剂盒化验规程：

样品的稀释：

由于测定的高灵敏度，在用于正常测定之，应稀释每个样品。A 1:20血清或血浆稀释适用于大多数样本，而母乳样本可能需要稀释1:50000。

对于产生校准曲线范围外结果的样品的绝丨对定量，取较小值或较大值可能需要稀释。如果不确定样品水平，则在之用一个或两个代表性样品进行连续稀释强烈建议运行整个板。

为了制备1:20稀释的样品，将20µL样品转移到380µL 1X稀释剂中。这样可以得到1:20的稀释度。混合非常为制备1:50000稀释的样品，将5µL样品转移至495µL 1X稀释剂中。这给你一个1： 100稀释。充分混合。然后，将2µL的1X稀释剂转移至998µL，稀释1:100的样品。对样品进行1:50000稀释。在每个阶段充分混合。

来源：https://www.amyjet.com/products/KT-489.shtml