用户指南丨艾美捷总5-mC RNA甲基化定量分析试剂盒

DNA中的5-甲基胞嘧啶（5-mC）通过DNA甲基转移酶在胞嘧啶环的5个碳原子上共价加成甲基而产生。这个过程已经被充分研究，并且通常与基因表达的抑制有关。还观察到在人类中，5-mC存在于各种RNA分子中，包括tRNA，rRNA，mRNA和非编码RNA（ncRNA）。5-mC似乎在某些类别的ncRNA中富集，但在mRNA中相对耗竭。5-mC的水平在动物基因组中是可变的，范围从某些昆虫中无法检测到的量到人类细胞中总RNA的约0.1-0.45％。在mRNA中发现了大多数的5-mC位点（83％）。在这些转录物中，5-mC似乎在蛋白质编码序列中被耗尽，但富含5＇和3＇UTR。两种不同的甲基转移酶 已知NSUN2和Dnmt2催化真核RNA中的5-mC修饰。有强有力的证据表明，RNA胞嘧啶甲基化会影响各种生物学过程的调控，例如RNA稳定性和mRNA翻译。

艾美捷MethylFlash总5-mC RNA甲基化定量分析试剂盒包含 5-mC RNA 甲基化定量实验所需的所有佳化试剂，可以使用任何物种的 total RNA 样品来进行实验，如哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒等，无论是从培养细胞、新鲜或冷冻的组织、血浆/血清或体液等来源皆可适用。  

总5-mC RNA甲基化定量分析试剂盒的原理和步骤：

该试剂盒包含所有用于定量5-mC RNA甲基化的试剂。在测定中，RNA结合到经过特殊处理以具有高核酸亲和力的条带孔上。使用捕获和检测抗体检测RNA中的5 mC，然后通过在微孔板分光光度计中读取荧光进行荧光定量。5-mC RNA的百分比与测得的荧光强度成正比。

总5-mC RNA甲基化定量分析试剂盒用户指南：

用途：MethylFlash™ 5-mC RNA甲基化ELISA简易试剂盒（荧光法）适用于使用从任何物种分离的总RNA检测全球5-mC RNA甲基化水平，包括各种形式的哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒，包括但不限于培养的细胞、新鲜和冷冻组织、血浆/血清样本和体液样本等。

输入RNA：每次测定的RNA量可以为50至300 ng。对于理想的定量，输入的RNA量应为200纳克，因为RNA中的5-mC因组织而异，可能更少在某些物种中占总RNA的0.1%以上。

起始材料：起始材料可以包括各种组织或细胞样本，例如培养的细胞、新鲜和冷冻组织、血浆/血清样品、体液样品，等。

内部对照：本试剂盒中提供了阴性和阳性RNA对照。标准曲线可以进行（范围：0.05%至2%）。由于RNA中的全局5-mC可因组织而异，从正常和患病状态，建议运行重复样本，以确保信号生成的验证。该试剂盒将允许用户量化RNA中5-mC的绝丨对量确定两个不同RNA样品的相对5-mC状态。

注意事项：为避免交叉污染，请小心地将样品或溶液移到带状孔中。使用气溶胶屏障移液管吸头，并始终在液体转移之间更换移液管的吸头。穿在整个过程中戴手套。如果手套与样品接触，更换手套立即。

艾美捷MethylFlash总5-mC RNA甲基化定量分析试剂盒原则和程序：

图1：佳标准曲线示例用5-mC标准对照产生。 

图2：准确定量各种使用MethylFlash 5-mC RNA甲基化ELISA简易套件（荧光计）。结果密切相关与通过MS-LC获得的那些相同。

来源：https://www.amyjet.com/featured/5-mc-rna.shtml