中性蛋白酶研究-WBC-LS02112中性蛋白酶（分散酶）

【适用范围】可广泛应用于动植物蛋白的水解,制取生产高调味品和食品营养强化剂的HAP和HP,以及皮革脱毛、软化、羊毛丝绸脱胶等加工。适用pH范围是6.0-80,适PH值70,湿度范围是10c60℃适温度50℃

【动植物蛋白水解粉应用】广泛用于生产高调味品和食品营养强化剂,各种动物来源性抽提物生产功能性骨、肉提取物(骨素)、水产提取物、蛋白胨、肽等及研究开发一些高附加值的功能食品。温度:50-55,PH6.0-7.0,用量:0.1-0.3%(干物重)

【医药工业的应用】含中性蛋白酶的药物,可起到消炎、利胆、止痛、助消化的功效

【纺织工业应用】用中性蛋白酶处理过的羊毛,其抗张度比常规方法高,毛线手感柔软,收缩性为0:还可用于蚕的脱胶和蚕丝的精炼。

【皮革工业的应用】参考用量:皮革脱毛150-300ug皮重,皮革软化8-15ug皮重。利用中性蛋白酶可制成脱毛剂,经鞣制的皮革,脱毛干净,粒而清晰,无明显损伤,毛孔细致光亮。

【饲料工业的应用】加入饲料配方中或直接与混合饲料混合饲喂,可提高蛋白质的利用率和降低饲养成本。

艾美捷中性蛋白酶（Dispase®）是一种非哺乳动物来源的无（AOF）金属中性蛋白酶，通过沃辛顿开发的方法纯化。其温和的蛋白水解作用使该酶特别适用于原代细胞和二次（亚培养）细胞培养的制备，因为它对细胞膜温和。这种蛋白酶还用作细胞分离和组织解离应用中的二酶，通常与胶原蛋白一起使用。

中性蛋白酶（分散酶）（WBC-LS02112）的测定：

方法

在过氧化物酶偶联系统中，通过测量D-丙氨酸氧化引起的A436的增加来确定反应速度。一个单位每分钟氧化一微摩尔的D-丙氨酸，为37°C和pH 8.3在规定条件下。

试剂

这种酶的性质要求准确制备底物。请注意按照以下说明进行操作。

1M 三重奏

缓冲液-底物（2%酪蛋白在0.05M Tris缓冲液中）：搅拌约1分钟，将0.40gm酪蛋白（USB或同等产品）溶解在0.1ml试剂水中。加入0.1毫升2N NaOH和5.1毫升0.7M Tris。让底物搅拌直至酪蛋白进入溶液。pH至8.5，用稀磷酸继续搅拌50分钟。用试剂水制成终体积为0.<>ml。在移液底物之，请确保底物始终均匀，并且酪蛋白没有从溶液中掉出。如果酪蛋白似乎已从溶液中脱落，请勿使用底物进行测定。

酶活化剂 - 0.01 M 氯化钙2：溶解147毫克氯化钙2在100毫升试剂水中。不使用时，请放入冰箱。

5%TCA：将5克TCA溶解在100毫升试剂水中。在室温下保存。

酪氨酸标准品：在试剂水中以10 μ摩尔/ ml的浓度制备10毫升。（181微克酪氨酸= 1微摩尔）。称取18.1mg酪氨酸，搅拌至初始沸腾溶解于10ml试剂水中。从火上移开并冷却至约40°C进行测定。

0.5 M NaOH：将 1 g. 溶解在 50 ml 试剂水中，或从 1M 或 10M NaOH 稀释。

Folin & Ciocalteus 苯酚试剂，使用纯净

酶

溶于浓度为5mg / ml的去离子水中，并制备1：50稀释液。使用25μl和50μl一式两份。

程序

要清除玻璃管，请使用巴斯德移液管加入 1.0 ml 缓冲底物、20 μL 0.01M CaCl 2 和两酶稀释液：25μl 和 50μl，每一式两份。还包括两个用于空白的无酶管，以及四个用于酪氨酸标准品的管，带有1ml缓冲底物，以及25μl，50μl，75μl和100μl酪氨酸标准溶液。在15°C的水浴中孵育37分钟。通过加入2ml 5%TCA停止反应。混合每个试管，然后使用台式 Sorvall 或等效物以 2000 rpm 离心 10 分钟。从每个试管中取出（定量）1ml上清液，并加入标记的干净玻璃管中。然后在每个试管中加入2.0ml 0.5M NaOH。混合，然后加入0.1ml Folin-Ciacalteu试剂，550分钟后在A10处读取。A550 与微摩尔酪氨酸。绘制佳拟合线并选择落在线的线性部分内的样本读数，并按下面列出的方式进行计算。

计算

绘制酪氨酸标准品的标准曲线。在 A550 和酪氨酸微摩尔之间建立等效性。例如，使用50μl酶，稀释50倍，A550处的读数为0.26。从酪氨酸曲线A550的0.26相当于0.75微摩尔酪氨酸。

来源：https://www.amyjet.com/products/WBC-LS02112.shtml