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物化性质 白色结晶或冻干粉,易溶于水,pI7.8,适pH值7.7。稳定性:稳定 pH范围2-4.5,冷藏冻干粉或结冻的酶液可保存数年活力不变。抑制剂有脱氧核糖核酸(竞争性抑制剂)、变性脱氧核糖核酸(比天然的更有效)、 0.0005 mol/L Mg2+。酶反应:一催化核糖核酸的核糖部分3'和5'磷酸二酯键的裂开,形成具有2',3'-环磷酸衍生物寡聚核苷酸。
核糖核酸酶 A用途:
1、从 DNA:RNA 杂交体中去除未杂交的 RNA 区;
2、确定 RNA 或 DNA 中的单碱基突变的位置。在 RNA:DNA 或 RNA:RNA 杂交体中,若存在单碱基错,可用 RNAseA 识别并切割。通过凝胶电泳分析切割产物的大小,即可确定错配的位嚣;
3、RNA 检测。RNA 酶保护分析法是近年来发展起来的一种检测 RNA 的杂交技术;
4、降解 DNA 制备物中的 RNA 分子。
艾美捷核糖核酸酶 A(WBC-LS003435)在胞苷残基处的切割速度是尿苷残基的两倍(Richards和Wyckoff 1971)。Thr45被发现对介导嘧啶特异性重要,既通过与嘧啶碱形成氢键,又在空间位上排除嘌呤碱(del Cardayré和Raines 1994)。Asp83的侧链对于稳定含尿苷底物裂解过程中的过渡态很重要;这种残留物对胞苷切割的动力学没有影响(del Cardayré和Raines 1995)。
RNase A对嘧啶核苷键具有特异性(Volkin和Cohn 1953)。反应被认为分两步进行。第一步,裂解3',5'-磷酸二酯键,同时生成2',3'-环磷酸二酯中间体。在第二步中,环磷酸二酯被水解成3'-单磷酸基团。第一步是关于底物的含氮碱的非特异性;然而,第二步对于末端为2',3'-环磷酸盐的嘧啶核苷酸是绝-对特异性的。RNase B与RNase A对环胞苷酸和酵母RNA具有相同的特异性(Plummer和Hirs 1963)。RNase A显示出对较大底物的偏好(Nogués等人,1995)。
应特别注意酶的处理,因为它与玻璃表面的亲和力。该酶保持活性,但在冻干时聚集,并在低离子强度的温度≥2°C的溶液中聚集。RNase A的加热溶液使DNA酶失活可能不令人满意,因为如果发生沉淀形成并且热处理的DNase可能会随着时间的推移重新激活,RNA酶活性可能会丧失。代码: RPDF 适用于需要低 DNase 和蛋白酶水平且无需进一步处理的应用。代码: RAF在某些应用中无需处理即可使用。要热处理 RAF,请使用 10mM 乙酸盐 pH 5.0 和或不带 15mM CaCl 2 在 15°C 或更长时间下在 100°C 下 80 分钟。 如果在中性pH下加热,可能会沉淀。代码的热处理:由于磷酸盐的存在,RASE会沉淀。
核糖核酸酶 A部分引用文献:
Andini, S. , D'Alessio, G. , DiDonato, A. , Paolillo, L. , Piccoli, R. and Trivellone, E.
Comparative Proton NMR Studies of Bovine Semen and Pancreas Ribonucleases , Biochim Biophys Acta 742 , 530 , 1983
Anfinsen, C. and White, F.
The Ribonucleases , in The Enzymes Vol. 5 , (Boyer, P., Lardy, H., and Myerback, K., Eds.) , Academic Press, NY , 95 , 1961
Anfinsen, C. , Redfield, R. , Choate, W. , Page, J. and Carroll, W.
Studies on the Gross Structure, Cross-Linkages, and Terminal Sequences in Ribonuclease , J Biol Chem 207 , 201 , 1954
来源:https://www.amyjet.com/products/WBC-LS003435.shtml
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