艾美捷Fluorochrome Ki67抗体操作注意事项

Ki67是正在进行的细胞增殖的内在标志物，存在于细胞周期的所有活性阶段（G1-M）。这种抗体是多克隆的，在兔体内被培养成人肽序列TPKEKAQALEDLAGFKLFQT，该序列在注射到兔体内之通过戊二醛与甲状腺球蛋白偶联。该抗体已用于大鼠和人脑组织的免疫细胞化学。小瓶在1/100的稀释度下含有约200ul。抗体可在BSA稀释剂（50mM KPBS、0.4%Triton、1%BSA、1%NGS）中进一步稀释至至少1/20000。抗体应储存在-20℃。还包括用特定肽吸收的滤纸，用于阻断。可将500ul稀释的抗体添加到管中以实现10uM的阻断。在室温（RT）下孵育至少1小时，然后施用于组织。抗体与该肽特异性阻断，而不与滤纸上吸收的其他肽阻断。

Fluorochrome Ki67抗体（FC40001）基本操作：

新鲜冷冻的10-30微米切片在室温下在4%多聚甲醛（FA）中固定1小时，在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中洗涤，然后在90%的温度下在10%柠檬酸钠中处理40分钟。将切片在柠檬酸钠溶液中冷却20分钟，在PBS中洗涤，并用PBS中的0.1-0.3%H2O2孵育10至30分钟。再次在PBS中洗涤组织，然后用Avidin/Biotin阻断试剂盒（Vector cat#SP-2001）处理，在RT下洗涤并用BSA稀释剂孵育1小时。在RT下将Ki67抗体（1/20000）施加到组织上过夜。在PBS洗涤后，将切片在生物素化GAR中以1/1000（Vector labs cat#BA1000）在RT下孵育1个小时，洗涤，然后在阿维丁/生物素（Avidin/Biotin）中以1/1000（Vector labs cat#PK6100）在室温下孵育1小时。洗涤后，用二氨基联苯胺（0.04%）在0.1M乙酸钠中与0.06%H2O2混合六分钟（也可以加入2.5%的氯化镍）观察信号。然后对切片进行水洗（如果需要，进行复染）、脱水并盖上盖子。

该抗体也适用于Fluorochrome的BRDU抗体可视化方案。可以使用4%FA灌注组织代替新鲜冷冻切片。

保存建议：

小瓶中含有约200微升1/100稀释液。 抗体可在BSA稀释液（50 mM KPBS、0.4%Triton、1%BSA、1%NGS）中进一步稀释至至少1/20，000。 抗体应在-20 ℃下储存。 还包括吸附有用于封闭的特异性肽的滤纸。 可向管中加入500 μ l稀释的抗体以获得10 μ M阻断。 应用于组织，在室温（RT）下孵育至少1小时。 抗体特异性地与该肽阻断，而不与吸附在滤纸上的其他肽阻断。

Ki67抗体（FC40001）出版物：

Perez et al, The Journal of Neuroscience, May 13, 2009:29(19):6379-6387

Garcia-Fuster et al, in preparation: Individual differences in adult hippocampal neurogensis following experimenter administration of cocaine.