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Fluorochorome BrdU抗体-W(FC60001)的表征:
A、 齿状回BrdU阳性细胞
(60倍)的成年老鼠
注射BrdU。在共聚焦显微镜上拍摄的照片
B、 齿状回BrdU阻滞
通过进行阻断研究确定特异性。相邻部分从将先注射过BrdU的成年大鼠的海马与单独的BrdU抗体-W(A-60X)或与BrdU(B-60X)预孵育的BrdU抗体-W。注意在A中标记并且在B中没有标记,表明抗体的特异性舞台调度。
储存和准备:
您将收到的小瓶含有约200μl,稀释度为1/100。BrdU抗体-W可以在BSA稀释剂(50mM KPBS,0.4%Triton,1%)中进一步稀释至至少1/30000BSA,1%NGS)。抗体应储存在-20℃。你会收到抗体解冻。重新冷冻除非您打算在48小时内使用它。避免多次重新冻结抗体。还包括用BrdU吸收的滤纸用于阻塞。500μl稀释的抗体可以加入管中以获得10μM的块。在室温下孵育至少1小时(RT)应用于组织之。抗体特异性地阻断BrdU并且不阻断其他肽被滤纸吸收。
Fluorochorome BrdU抗体-W协议:
将新鲜冷冻的10-30微米切片在4%多聚甲醛(FA)中于室温固定1小时,在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中洗涤,然后用50%甲酰胺/2X SSC(300 mM氯化钠和30 mM柠檬酸钠)在65°C下放置2小时。这些部分用2倍清洗SSC,在2N HCL中37C培养30分钟,然后直接置于100mM钠中在室温下硼酸盐(pH8.5)10分钟。切片在PBS中洗涤并与0.1至0.3%H 2 O 2的PBS溶液10至30分钟。再次用PBS洗涤组织,然后用PBS处理一种亲和素/生物素阻断试剂盒(载体cat#SP-2001),用BSA稀释剂洗涤和孵育在室温下放置1小时。将BrdU抗体-W(1/30000)在室温下过夜施用于组织用PBS洗涤将切片在1/1000的生物素化GAR(Vector labs-cat#BA1000)中于室温孵育1小时,洗涤,然后在1/1000的抗生物素蛋白/生物素(Vector labs-cat#PK6100)中孵育1小时。洗涤后,用二氨基联苯胺显示信号(0.04%)在0.1M乙酸钠和0.06%H2O2中浸泡6分钟(氯化镍2.5%)
也可以添加)。然后将切片水洗(如果需要复染),脱水并封面滑动。
出版物:
Garcia-Fuster et al, in preparation: Individual differences in adult hippocampal neurogensis following experimenter administration of cocaine.
艾美捷科技是Fluorochorome的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
来源:https://www.amyjet.com/brand/Fluorochrome.shtml
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