艾美捷CompTech丨人补体C4蛋白（浓缩型）功能和性质

名称： C4 (浓缩) 蛋白

编号： A105c

规格： 1000 µg/vial

浓度： .0 4 mg/mL (实际浓度见分析证书)

类型 液 体

活动： >70%与正常人血清标准(见Cert。的分析)

纯度： >90%由SDS-PAGE

缓冲区： 10 mM磷酸钠，145 mM氯化钠，pH 7.3

消缺系数。 A280 nm在 1.0 mg/mL 时 的=为 1.03

分子量： 205000Da (3链)

防腐剂： 无，0.22µm过滤。

存储： - 7 0oC或以下。避免冻融。

根源 正常的人类血清 (经认证的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗体检测均为阴性) 。

预防措施 在处理人体血液制品时要采取常规的预防措施。

一般说明

天然C4是一种天然的糖基化多肽，含有三个二硫链。C4是补体激活的经典途径 和凝集素途径的激活的核心。每个途径的启动产生的蛋白水解酶复合物 (经典途径中 的C1q/C1r/C1s和凝集素途径中的MBL/MASP1/MASP2) 与目标表面结合。这些酶在C4中 切割一个肽键，释放过敏性毒素C4a并激活C4b。与C3一样，亚稳态C4b的硫酯具有高  度活性，能够与C4b与目标表面的氨基或羟基反应并共价偶联。C4有两种变体 (C4A和 C4B) 。只有一种类型的动物通常患有C4B。变体C4A和C4B的有利附着位点不同。C4A  产生的亚稳态C4b主要附着在氨基上，而C4b变体产生的C4b与羟基和氨基结合良好    (Law，S。K.A.和多兹。W. (1997)).表面结合的C4b是C3/C5转化酶复合物C4b、C2a形 成的基础。这种酶激活C3，沉积C3b，从而将自己从一个弱的C5转化酶转化为一个具  有K的高效C5转化酶m对于C5的3000倍，比C4b的要低，C2a酶单独使用(Rawal N。和潘 伯恩M。K. (2003)).表面结合的C4b是一种弱调理素，可被红细胞、淋巴细胞和吞噬细 胞上的受体 (CR1) 识别。C4b的所有补体激活功能在产生C4c和C4d的阿尔法链被裂解 时丢失。只有当C4b与C4b结合蛋白C4因子I辅助因子之一结合时，C4b结合蛋白 (C4bB P) 、膜辅助因子蛋白 (MCP) 或补体受体1 (CR1) ，蛋白酶因子I才能切割C4b。

物理特性和结构

C4是作为单链蛋白合成的，但在血浆中以205,000 Da的3链分子循环。在排泄 过程中，蛋白质被糖基化 (6.9 %) ，在阿尔法链中形成一个分子内硫酯，并经历有 限的酪氨酸硫酸化。这个

三个二硫键连接链的分子量分别为97、000 (阿尔法) 、75、000 (beta) 和33、 000 (伽马) 。在补体激活过程中，C4a (8,757 MW) 被从阿尔法链的n端分离出来 ，产生C4b (192,000 Da) 。通过因子I切割表面结合的C4b，得到可溶性的C4c片 段 (147000Da) 和细胞结合的C4d片段 (45000Da) 。

功能

C4被经典途径的C1q-C1r-C1s复合物或凝集素途径的M1 (MBL/MASP1/MASP2复合 物) 中的C1s酶进行蛋白水解激活。C4a的释放留下了亚稳态的C4b，其中硫酯能够短暂 地将C4b共价附着在激活表面。这些相同的蛋白酶 (C1和M1) 裂解并激活C2，C2a亚基 与C4b结合形成C3转化酶 (C4b，C2a) 。C4b是允许C2a作为蛋白酶切割C3和C5的调节亚 基。在C3被裂解后，C3b被沉积在形成C5转化酶C3b、C4b、C2a的酶位点上。C3b亚基结 合C5，允许C4b，C2a酶

蛋白质水解C5。虽然C4b，C2a能够裂解C5，但C5的Km是3000倍，因此它在激活C5方面 的效率按比例低于C3b，C4b，C2a酶。

C4B变体能够通过蛋白质上的碳水化合物和氨基共价结合。这也是其在补体激 活中具有较高的溶血活性的明显来源。C4A更喜欢氨基，使其能够更好地附着在免疫 复合物等蛋白质上。

天然的C3和C4通过分子内硫酯键连接其C3d或C4d结构域中的甘氨酸和谷氨酰  胺残基。这些硫酯键容易受到氨、甲胺、羟胺和联氨等胺的亲核攻击，所有这些胺都 已被用于灭活补体

血清

纯化的c4对冻融为敏感，在每次冻融循环中损失510%的活性。它对诸如- 20等中间温度也很敏感oC. 它在中等温度下停留的时间越长，失去的活性就越多 。几个小时oC可以完全灭活它，即使它仍然被完全冻结。

测定

C4可以用C4缺失的人或C4缺陷的豚鼠血清进行检测，因为在没有C4的情况下 ，抗体致敏的绵羊红细胞 (EA) 的裂解非常差。使用EA和C4-D豚鼠血清的溶血滴度对 c4非常敏感，50%的裂解需要小于1 ng C4。然而，需要注意的是，有一种c4旁路，它 允许c4缺陷和c4耗尽的血清在一定条件下有效地溶解EA(May，J。E.和弗兰克，M。M.

( 1973) ；Knutzen斯图尔，K。L.以及其他人(1989)).

参考文献

Knutzen Steuer KL, Sloan LB, Oglesby TJ, Farries TC, Nickells MW, Densen P, Harley JB, Atkinson JP. (1989) Lysis of sensitized sheep erythrocytes in human sera deficient in the second component of complement. J Immunol. 143:2256-61.

Law, S.K.A. ａnd Dodds, A.W. (1997) Protein Sci. 6:263-274.

Law, S.K.A. ａnd Reid, K.B.M. (1995) Complement 2nd Edition (ISBN 0199633568) Oxford University Press, Oxford.

来源：https://www.amyjet.com/products/A105c.shtml