艾美捷CompTech丨人补体C5蛋白说明和物理特性

名称： C5蛋白

编号： A120

规格： 250 µg/vial

浓度： 1.0 mg/mL (实际浓度见分析证书)

类型 冷冻液体

活动： >值为80%，与正常人血清标准相比。

纯度： >95%由SDS-PAGE

缓冲区： 10 mM磷酸钠，145 mM氯化钠，pH 7.2

消缺系数。 A280 nm在1.0 mg/mL时的=为1.03

分子量： 190000Da (2链)

防腐剂： 无，0.22µm过滤

存储： - 7 0oC或以下。避免冻融。

根源 正常的人类血清 (经认证的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗体检测均为阴性) 。

预防措施 在处理人类血液制品时要采取常规的预防措施。

一般说明

天然人类C5是一种天然糖基化 (1.6%) 多肽，包含两个二硫键链。C5对于膜攻 击复合物 (MAC) 的形成是必不可少的，并可被补体激活的所有三种途径激活。补体 激活的每个途径都产生蛋白水解酶复合物 (C3/C5转化酶) ，它们与目标表面结合   (Ross，G。D. (1986)).这些酶在C5的较大的阿尔法链中切割一个肽键，释放高效的 过敏性毒素C5a (74个氨基酸) 并激活C5b。这是C5b-9复合物组装过程中唯一的蛋白 水解步骤。C5b是不稳定的，但它仍然与激活复合物结合短暂的时间 (~2分钟) ，在 此期间，它要么与周围液体中的一个C6结合形成C5b，6，要么衰变并聚集，不再能够 形成MAC。C5b，6复合物也可能继续与C3/C5转化酶结合，其中单个C7的结合暴露了一 个膜结合区域，而C5b，6,7可以部分插入靶细胞的胆脂层。到目为止，该复合物可 能会从目标细胞扩散出去，进入附近细胞的细胞膜。这被称为旁观者裂解或“反应性 裂解” ，可以是一个重要的病理来源。每个C5b-7复合物都可以结合一个C8蛋白分子 ，从而使该复合物更牢固地插入到细胞膜中。这个复合物与C9结合，每个结合的C9可 以结合另一个C9，起始形成一个包含多达18个C9分子的环状结构(Podack，E。       R. (1984)).具有一个或多个C9的C5b-9复合物被称为补体的膜攻击复合物 (MAC) 。  并不是所有的C5b-8配合物都有完整的C9环，平均每个C5b-8配合物只有3个C9。C9的 完整的蛋白环形成了电子显微镜上看到的孔，它们导致代谢物和小蛋白质泄漏出细胞 ，以及水进入细胞。如果将足够数量的水插入细胞膜，那么由于渗透压，流入细胞的 水就会使细胞膜破裂，使目标细胞 (或一个旁观者细胞) 的全部内容物被释放出来。 任何一种过程都可能导致细胞死亡。初人们认为每个细胞只需要一个C5b-9复合物( 被称为裂解的“一打击理论”(隆美尔F。A.和梅耶尔，M.M. (1973) )，但这可能是不正确的。例如，一个红细胞需要大约850个C5b-9 复合物，通过C7分子的数量来衡量，才能发生裂解(Bauer，J。以及其他人     (1979)).受CD59保护的抗MAC的宿主细胞需要足够数量的C5b-9来捆绑所有的CD59 ，然后再捆绑大约850个C5b-9。有核细胞的裂解需要更多的C5b-9复合物，因为 它们的大小和在这些细胞中存在多种防御机制。

物理特性和结构

分子量：  190,000 Da，由两个二硫键连接链组成。阿尔法链是 115,000 Da ， 贝塔链是75,000 Da 。阿尔法链和阿尔法链是通过一个二硫键连接起来的。C5 的 pI为4.7到5.5。

C3/C5转化酶切割C5，从alpha链的n端释放C5a ( 一个74个氨基酸片段，8268 Da去糖基化，10400+1000糖基化) 。C5b片段 (181,000 Da) 与C6结合，启动膜攻击 复合物的自发组装。

CAS编号：80295-53-0

测定

C5简单的检测方法是使用C5耗尽的人血清，并测量EA (经典途径) 或Er (替 代途径) 的裂解，作为添加的测试样品或标准纯化C5浓度的函数。每个独特的应用程 序都可能需要确定适当的条件。然而，一个典型的检测方法包括在湿冰上混合25µL  C5-Dpl，含c5的样品用GVB++稀释到1到10 ng C5，以及足够的GVB++使体积达到300µL 。EA (3 X 107后加入200µL)。纯化的C5或正常的人血清 (NHS) 可作为C5的来源。 将反应混合物在37个条件下孵育30 mino加入C和1 mL的冷GVBE。然后混合反应并离心 ，旋转未裂解的细胞。然后在415 nm处分析上清液中释放的血红蛋白，并与不含C5的 空白细胞 (背景裂解对照) 和用275µL水代替GVB++和25µL C5-Dpl (100%裂解对照)  进行比较。

许多其他的检测方法已经被描述为使用EA预加载C1 (EAC1细胞) 或预加载经典 途径C5转化酶 (EAC1423细胞) 。然而，所有这些检测方法都需要使用多种纯化的补 体成分或更难以制备的试剂(Dodds，A。W.和Sim，R。B. (1997) ；摩根，B。P. (2 000)

参考文献

Bauer, J., Podack, E.R. ａnd Valet, G. (1979) Determination of the number of lytic sites in biconcave ａnd spheroid erythrocyte ghosts after complement lysis. J. Immunol. 122:2032-2036.

Dodds, A.W. ａnd Sim, R.B. editors (1997) Complement. A Practical Approach (ISBN 019963539) Oxford University Press, Oxford.

来源：https://www.amyjet.com/products/A120.shtml