艾美捷丙二醛(MDA)elisa检测试剂盒样品的采集和储存方法

艾美捷丙二醛(MDA)elisa检测试剂盒#EKF60157样品采集和储存（通用）：

血清：将全血样品在室温下放置2小时，或在2-8°C下放置过夜，以约1000×g离心20分钟，收集上清液并立即进行测定。采血管应该是一次性的、无热原的、无内毒素的。

血浆：使用EDTA-Na2或肝素作为抗凝剂收集血浆。在收集样品后30分钟内，在2-8°C下，以1000×g离心15分钟。收集上清液并立即进行测定。避免溶血、高胆固醇样品。

组织匀浆：由于溶血性血液与测定结果有关，有必要通过用预冷却的PBS缓冲液（0.01M，pH=7.4）清洗组织来去除残留的血液。称重后将组织切碎，并在PBS中匀浆（体积取决于组织的重量。正常情况下，9mL PBS适用于1克组织片。建议将一些蛋白酶抑制剂添加到PBS中），并在冰上使用玻璃匀浆器。为了进一步破坏细胞，你可以用超声波细胞破坏器对悬浮液进行超声处理，或者对其进行冻融循环。然后将匀浆以5000×g离心5分钟以获得上清液。总蛋白浓度通过BCA试剂盒测定，每个孔样品的总蛋白浓度不应超过0.3mg。

粘附和悬浮细胞培养：使用三个T25烧瓶或一个T75烧瓶进行细胞培养，细胞数量（1x107）；

1.悬浮细胞：以2500rpm在2-8℃下离心5分钟；收集澄清的细胞培养上清液；

2.粘附细胞：直接收集上清液；在2-8℃下以2500rpm离心5分钟；收集澄清的细胞培养上清液以立即检测或在-80℃下单独储存

细胞裂解物的制备：两种类型的细胞裂解物如下所述。

1.悬浮细胞裂解物：以2500rpm在2-8℃下离心5分钟；然后将预冷却的PBS加入收集的细胞中，轻轻混合。通过重复离心重新收集细胞。加入0.5-1ml RIPA裂解缓冲液（由于干扰抗原抗体反应，不建议使用NP-40裂解缓冲液或Triton X-100表面活性剂）。添加合适的蛋白酶抑制剂（如PMSF，工作浓度：1mmol/L）。在冰上溶解细胞30分钟-1小时。在裂解过程中，使用移液器吸移或间歇摇动离心管以完全裂解蛋白质。或者，通过超声波细胞分裂器使细胞破碎（300W，3~5/次，30间隔，4-5次）或超声波发生器（14μm，30）。裂解液或超声波破碎结束时，以10000rpm在2-8℃下离心10分钟。然后，将上清液加入EP管中，并在-80℃下储存。

2.粘附细胞裂解物：吸收上清液，加入预冷PBS一次。然后，加入0.5-1ml RIPA裂解缓冲液（由于干扰抗原抗体反应，不建议使用NP-40裂解缓冲液或Triton X-100表面活性剂）。添加合适的蛋白酶抑制剂（如PMSF，工作浓度：1mmol/L）。用细胞刮刀轻轻刮去附着的细胞。将细胞悬浮液加入离心管中。在冰上溶解细胞30分钟-1小时。在裂解液处理过程中，使用尖端移液或间歇性摇动离心管以完全裂解蛋白质。或者，通过超声波发生器（14μm，持续30s）或超声波细胞破坏器（300W，3~5s/次，间隔30s，4-5次）对细胞进行破碎。裂解物/超声波破碎结束时，在2-8℃下以10000rpm离心10分钟。然后，将上清液加入EP管中，并在-80℃下储存。

其他生物流体：在2-8°C下，以1000×g离心样品20分钟。收集上清液并立即进行测定。

丙二醛(MDA)elisa检测试剂盒试剂制备和储存：

使用，将所有试剂和样品置于室温下20分钟。

1、洗涤缓冲液：

如果浓缩液中形成晶体，可以用40°C水浴加热（加热温度不应超过50°C）并将其轻轻混合，直到晶体完全溶解。溶液在使用应冷却至室温。

用去离子水或蒸馏水将30ml（对于48T为15ml）浓缩洗涤缓冲液稀释至750ml（对于48T为375ml）洗涤缓冲液

（去离子水或蒸馏水的推荐电阻率为18MΩ）。将未使用的溶液放回2-8°C。

2、标准：

1). 将1ml样品稀释缓冲液加入一根标准管（标记为零管）中，使管在室温下保持10分钟并充分混合。

注：如果标准管浓度高于试剂盒的范围，请稀释并标记为零管。

2). 用1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64和空白分别标记7根EP管。向每个样品中加入0.3ml样品稀释缓冲液

管将0.3ml上述标准溶液（来自零管）加入第一管，并充分混合。从第一个转移0.3ml管至第二管，并将它们充分混合。将0.3ml从第二管转移到第三管，并将其充分混合，以此类推。样品空白对照使用稀释缓冲液。

注意：好在2小时内使用标准解决方案。

3、生物素标记抗体工作液的制备：

在实验1小时内准备好。

1） 计算所需的工作溶液总体积：0.05ml/井×井数。（允许比总体积。）

2） 用抗体稀释缓冲液以1:100稀释生物素检测抗体，并将其充分混合。（即将1ul生物素标记的抗体加入99ul抗体稀释缓冲液中。）

4、HRP-链亲和素偶联物（SABC）工作溶液的制备：

在实验30分钟内准备好。

1） 计算所需的工作溶液总体积：0.1ml/孔×孔数。（允许比总量多0.1-0.2ml体积）

2） 用SABC稀释缓冲液以1:100稀释SABC，并将其充分混合。（即在99ul SABC稀释液中加入1ul SABC缓冲区。）

来源：https://www.amyjet.com/products/EKF60157.shtml