艾美捷SynaptoGreen C4图例分析&文献参考

另一方面，在胞吐、染料与神经递质一起从囊泡中释放，从而导致荧光信号的降低。因此，荧光的变化强度反映了胞吞/胞吐或突触活动的量。这个内吞过程中荧光增加的速率，“开启速率”和胞吐过程中的荧光减少，即“脱落率”，因染料而异。在里面一般来说，具有较长亲脂性尾部和较多双键的染料具有较高的对膜的亲和力，从而具有较高的开启速率和较低的关闭速率。一些苯乙烯基染料可以通过离子通道进入细胞。突触绿C18具有长碳链，不能通过离子通道，已被用作区分染料吸收机制的对照。突触绿色和突触红色是不可修复的。AM和HM染料是醛固定性神经末端染料。

当使用神经末梢染料时，研究人员经常遇到的一个问题是非特异性膜染色引起的背景荧光。尽管大多数背景荧光可以通过反复洗涤来去除，问题是对于具有较长尾部或更多双键的染料仍然很重要，特别是当染料用于组织制剂时。Biotium提供各种背景用于神经末梢染料的还原剂。ADVASEP-7是一种磺化β-环糊精，有助于在洗涤过程中去除染料。SCAS淬火

无需重复wsh步骤的膜结合染料的荧光. 磺基罗丹明101是一种能猝灭背景的红色荧光染料通过FRET从绿色神经末端染料发出荧光（5）。Biotium还提供神经终端染色套件，包括染料和背景还原剂。

艾美捷SynaptoGreen C4#70020图例分析：

图1：突触绿C4的吸收和发射光谱在脂质体中。其他突触绿色染料的光谱相似

图2：突触红C2在脂质体。其他突触红染料的光谱相似

SynaptoGreen C4化验方案：

以下是培养的神经末梢染色方案的一个例子盖玻片上的神经元。神经末端染料也可用于标记内吞作用非神经元细胞类型中的囊泡。染色可以在4℃下进行C表示选择性质膜的标记；室温或37度C、 细胞内吞作用染色通常在10分钟内发生。可以使用除Tyrode溶液以外的缓冲液习惯于添加钠通道阻断剂河豚毒素（TTX）是可选的，其目的是阻断动作电位，防止突触小泡在染色。可能需要确定特定应用的适合协议由用户进行；参见参考文献，了解脑切片染色方案的示例，以及其他细胞类型。

1.在50mM蒂罗尔中将神经末梢染料稀释至终浓度为4uM解决方案将盖玻片与细胞一起放入此溶液中1分钟室温。使用足够的溶液将细胞完全浸没。

2.将盖玻片转移到Tyrode+0.5μM河豚毒素（TTX，目录号。00061）溶液在室温下搅拌1分钟。

3.在室温下，用Tyrode+TTX清洗盖玻片数次。

注：为了减少背景，可以使用1mM ADVASEP-7（目录号70029）添加到洗涤溶液中。或者，SCAS（目录号70037）可以是用于在不重复洗涤的情况下骤冷背景。培养盖玻片在室温下在Tyrode+TTX+0.5mM SCAS中保持4分钟。

4.将盖玻片安装在Tyrode+TTX中并进行成像。注：对于SynaptoGreen染料，50μM磺基罗丹明101（目录no.80101），以猝灭细胞外荧光。

注意：SynaptoGreen和SynaptoRed染料不可固定。AM和HM染料（见相关产品）是可固定醛的神经末梢染料。

参考文献：

1. Vida, TA ａnd Emr, SD. J. Cell Biol 128, 779(1995).

2. Meyers, JR, et al. J Neurosci., 23, 4054(2003).

3. Kay, AR, et al. Neuron 24, 809 (1999).

4. Höltje, M, et al. J. Biol. Chem. 283(14):9289(2008)

5. Pyle, JL, et al. Neuron 24, 803 (1999).

来源：https://www.amyjet.com/products/BTM-70020.shtml