人白介素7受体(IL7R) ELISA 试剂盒

产品名称：人白介素28B(IL-28B) ELISA 试剂盒

产品规格：96T/48T

保存条件：2-8℃

保质期：6个月

产品用途：用于检测人血清、血浆、组织等样品中白介素28B（IL-28B）的含量。

实验原理

   试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人白介素7受体(IL7R)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人白介素7受体(IL7R)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

操作步骤

   实验开始，请提配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用一小时内配制），37℃,60分钟。 

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

人白介素7受体(IL7R)ELISA试剂盒

注意事项

1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是**加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 

3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 

4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 

5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

人白介素7受体(IL7R)ELISA试剂盒

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 

计算

   以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 

注意事项

1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

3.一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。

5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请乘以稀释倍数。

6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

7.底物请避光保存。 

8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。 

计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 

人白介素7受体(IL7R)ELISA试剂盒

试剂盒性能

1. 灵敏度高：可检测低至0.1pg/ml的IL-28B浓度。
2. 特异性好：对其他类似的细胞因子无交叉反应。
3. 操作简便：仅需一步加样，无需洗涤，一步即可完成检测。
4. 重复性好：标准曲线线性范围宽，适用于大量样本的检测。
5. 试剂盒组成：包含酶标板、标准品、酶联物、样品稀释液、洗涤液等。