您的位置:首页 > 产品展厅 > 化工原料 > 化学试剂 > 生化试剂 > 兔着丝粒蛋白E(CENPE) ELISA 试剂盒
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被相关指标的抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
ELISA试剂盒试剂盒组成:
中文名称 | 英文名称 | 规格 | 保存 |
ELISA酶标板(可拆卸) | Micro ELISA Plate(Dismountable) | 8×12 / 8×6 | 4℃/-20℃ |
冻干标准品 | Reference Standard | 2/1 支 | 4℃/-20℃ |
标准品&样品稀释液 | Reference Standard & Sample Diluent | 1瓶20mL/12mL | 4℃ |
浓缩生物素化抗体 | Concentrated Biotinylated Detection Ab | 1支120μL/70μL | 4℃/-20℃ |
生物素化抗体稀释液 | Biotinytated Detection Ab Diluent | 1瓶 10mL/6mL | 4℃ |
浓缩HRP酶结合物 | Concentrated HRP Conjugate | 1支120μL/70μL | 4℃(避光) |
酶结合物稀释液 | HRP Conjugate Diluent | 1瓶 10mL/6mL | 4℃ |
浓缩洗涤液(25×) | ConcentratedWashBuffer (25×) | 1瓶 30mL/16mL | 4℃ |
底物溶液(TMB) | Substrate Reagent | 1瓶 10mL/6mL | 4℃(避光) |
反应终止液 | S Solution | 1瓶 10mL/6mL | 4℃ |
封板覆膜 | Plate Sealer | 5/3 张 |
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产品说明书 | Product Description | 1 份 |
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质检报告 | Certificate of Analysis | 1 份 |
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特别说明: |
ELISA试剂盒检测准备工作:
1. 请提20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。
3. 标准品: 于10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。
4. 生物素化抗体工作液:实验计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用15分钟,以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液:实验计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。
当日使用。
注意事项:
A 仔细阅读说明书。
B 检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期,请勿使用。
C 按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)。
D 标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。
E 准备好所有实验额外所需物品,(比如移液器,试管,清洗器,酶标仪)。
F 按说明书将所用试剂平衡至室温,根据检测标本数量确定所需试剂的量。
G 检查试剂盒内每种试剂的贮存条件,保证所有试剂均按照试剂盒内说明书推荐的条件存储。
H 检查不稳定或者变质的试剂溶液(比如沉淀或变色)。有些试剂,比如标准品稀释液或者检测稀释液,可能在设计时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之,必需充分混匀。而由于沉淀物的特性,在加入酶标板之,必需不停搅拌。
I 保证充分的孵育时间和温度。
J 切勿使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。
K 在混合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫产生。
L 在实验开始之,安排好实验流程。
M 在实验开始之,清洁工作台。
N 若有问题,应与我公司或代理商的技术支持联系
结果判断:
1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设置复孔,则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘出标准曲线。
2. 推荐使用业的曲线制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。
会出现的问题及解决办法:
1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因:未加入酶标记物。
解决办法:请按照操作步骤进行。
b.原因:试剂盒内容物未能充分回。
解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进行操作。
c.原因:室温太低。
解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适当延长温育时间。
d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。
解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。
e.原因:试剂盒已过有效期限。
解决办法:请更换成仍在有效期限内的试剂盒。
2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。
a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。
解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。
b.原因:操作时间拖太久。
解决办法:请在方法熟练后再进行操作。
c.原因:微孔间相互污染。
解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。
d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。
解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。
e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。
解决办法:加样品或试剂时,吸头请勿接触微孔。
f.原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。
解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。
3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。
a.原因:室温太高(>25℃)。
解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。
b.原因:底物溶液受到污染。
解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。
c.原因:反应时间超过太久。
解决办法:请控制反应时间。
d.原因:酶标记物污染了盒内其它试剂。
解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)
4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。
a.原因:微孔中的试剂未能充分混合。
解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。
b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。
解决办法:请参考2-f.
c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。
解决办法: 请参考2-d.
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