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中文名称 | ELISA试剂盒 |
规格 | 96T/48T |
样本类型 | 血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液等 |
使用范围 | 科研实验,不得用于临床诊断 |
反应时间 | 1-5h |
试剂盒保存 | 2-8℃ |
有效期 | 6个月 |
货期 | 3-5天 |
试剂盒组成
1. 酶标板:用于包被抗原和加入酶标抗体;
2. 酶标抗体:与待测血清中的、、、、结合;
3. 抗原:用于包被酶标板,与待测血清中的、、、、结合;
4. 阴性对照血清:用于设置阴性和阳性对照;
5. 阳性对照血清:用于设置阴性和阳性对照;
6. 洗涤液:用于清洗酶标板;
7. 底物:用于显色反应;
8. 终止液:用于终止显色反应。
操作步骤
1. 准备工作
(1)将试剂盒从冰箱中取出,放置至室温;
(2)准备所需的试剂和样品;
(3)将酶标板用洗涤液清洗干净。
2. 包被抗原
(1)将抗原按照说明书要求稀释后,加入酶标板孔中,每孔100μL;
(2)将酶标板轻轻摇晃,使抗原充分覆盖酶标板孔底部;
(3)将酶标板放入湿盒中,4℃孵育过夜。
3. 洗涤和干燥
(1)取出酶标板,用洗涤液清洗5次,每次清洗时间为1分钟;
(2)用吸水纸轻轻吸干酶标板表面的水分。
4. 加样和孵育
(1)在每个酶标板孔中加入100μL待测血清;
(2)将酶标板轻轻摇晃,使血清充分覆盖抗原;
(3)将酶标板放入湿盒中,37℃孵育1小时。
5. 洗涤和干燥
(1)取出酶标板,用洗涤液清洗5次,每次清洗时间为1分钟;
(2)用吸水纸轻轻吸干酶标板表面的水分。
6. 加酶标抗体
(1)在每个酶标板孔中加入100μL酶标抗体;
(2)将酶标板轻轻摇晃,使酶标抗体充分覆盖抗原;
(3)将酶标板放入湿盒中,37℃孵育1小时。
7. 洗涤和干燥
(1)取出酶标板,用洗涤液清洗5次,每次清洗时间为1分钟;
(2)用吸水纸轻轻吸干酶标板表面的水分。
8. 加底物显色
(1)在每个酶标板孔中加入100μL底物溶液;
(2)将酶标板轻轻摇晃,使底物溶液充分覆盖抗原;
(3)将酶标板放入湿盒中,37℃孵育15-30分钟。
9. 终止反应并测量吸光度值
(1)在每个酶标板孔中加入50μL终止液;
(2)立即用酶标仪测量各孔的吸光度值。
计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
实验注意事项
1. 保证试剂盒的质量:选择正规厂家生产的试剂盒,确保试剂盒的质量和稳定性。
2. 严格控制实验条件:实验过程中要严格控制温度、pH值、离子强度等条件,以保证实验结果的准确性。
3. 避免交叉污染:实验过程中要避免交叉污染,确保每个步骤使用的试剂和材料都是清洁无污染的。
4. 标准化操作:实验操作要标准化,严格按照试剂盒说明书进行操作,避免人为误差对实验结果的影响。
5. 定期校准:定期对实验仪器进行校准,确保仪器的准确性和稳定性。
6. 保存好实验数据:实验过程中要保存好实验数据,以便后续分析和处理。
试剂盒性能:
1. 检测范围:1.95 nmol/L –100 nmol/L。
2. 灵敏度:低检测浓度小于0.78 nmol/L。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
合作单位:
中国医科大学、复旦大学、北京大学、贵阳医学院、中国农业大学
天津疾控中心、江南大学、山东大学、青岛大学、香港大学
云南省产品质量监督检验研究院
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