鸡肌球蛋白轻链9(MYL9)ELISA试剂盒

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双抗体夹心

本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的双夹心抗体ELISA为例介绍本法的操作程序。

① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干

③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干

④ 加底物液　→ 37℃ 15分钟，加终止液

⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

鸡肌球蛋白轻链9(MYL9)ELISA试剂盒

双夹心ELISA

此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为：

① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（Ab-2)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

④ 加入酶标抗Ab-2抗体（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液

⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。

竞争ELISA

此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射测定。其基本程序为：

① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液

④ 用ELISA检测仪测定OD值。

被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就减少，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合方法。此外，试验中应用酶标抗原的量较多。

阻断ELISA

本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：

① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干

② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

③ 加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干

⑤ 加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干

⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液

⑦ 用ELISA检测仪测定OD值。

本试验同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。