标题蛋白质纯化离子交换法

各种蛋白质分子上可能带有?同的电性，经过离子交换管柱，可依其分子带电性的差异而分离开? （Pharmacia 操作手册, Ion Exchange）。
    仪器设备：
    塑料管柱 （Bio-Rad Econo-Pac column 732-1010, 1.5×12 cm）
    分划收集器 （fraction collector, 另需准备干净试管约60 支）
    浓缩用离心机 （低速5,000 rpm） 及浓缩离心管Centriplus
 
    药品试剂：
    DEAE Sephacel （胶体体积约15 mL，预先以缓冲液Buffer A-0 平衡好）
    Buffer A-0 （如上述配法）
    Buffer A-300 溶离液：Buffer A-0 加有0.3 M NaCl
    Buffer A-500 溶离液：Buffer A-0 加有0.5 M NaCl
 
    方法步骤：
    1） 将Econo-Pac 管柱架好，并将三向阀及软管等组合完成。
    2） 震荡DEAE Sephacel 胶体使的悬浮，小心倒入管柱中，让胶体慢慢??，在??过程中随时加入buffer A-0，勿使胶体干掉。
    3） 待胶体??完全后，高?应在15 cm 左右。胶柱以buffer A-0 一直?洗，?速快慢可以?考虑；连接好收集器，每试管收2.5 mL。离子交换法的胶体平衡极为重要，可测?出液的pH 或离子浓?，看是否与buffer A-0 相同，??一样则需要再?洗的。
    4） 样本的添加方法同上述胶体过滤法，并启动分划收集器开始收集，当样本全部没入胶体后，再加入同体积buffer A-0。以buffer A-0 ?洗50 mL 后，去除胶体上方的缓冲液，但勿使胶体干掉。
    5） 然后依序以buffer A-300, buffer A-500 溶离的，每批次?洗各50 mL，注意?换浓?时，胶体上方勿残存上一种溶液。
    6） 收集所有分划，进?蛋白质定?分析以及GUS 活性测定，结果作图。
    7） 收集GUS 活性区，并以Centriprep-30 浓缩至 _______ mL （IEX），记得要保?100 μL。
    8） 离子交换胶体以buffer A-0 洗过50 mL 后，收起?交回。