标题顶空气相色谱法测定蚕蛹提取物中有机溶剂残留量

     目的建立蚕蛹提取物中有机溶剂残留量的测定方法。方法采用顶空进样毛细管气相色谱法，测定了蚕蛹提取物中汽油的残留量。以70%N,N-二甲基甲酰胺溶液为溶剂，色谱柱为HP-1毛细管柱（30m×0.32mm×0.25μm），FID检测器。汽化室温度200℃，检测器温度250℃，氮气为载气。柱温为程序升温：起始温度为40℃，保持10min，以10℃/min的速率升温至150℃，保持8min。结果本法线性关系良好，r为0.9976，精密度RSD为1.7%，平均回收率为98%～104%。结论该方法简便快速，灵敏度高，可作为蚕蛹提取物中有机溶剂残留量的测定方法。
　　
　　【关键词】顶空气相色谱法蚕蛹提取物有机溶剂残留量
　　
　　【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofresidualorganicsolventsinsilkwormpupaextract.MethodsThesamplesweredissolvedin70%N,N-dimethylformamide.MakeanquantitativeanalysisoftheresidualgasolineinsilkwormpupaextractbyheadspacecapillaryGC,andthechromatographicconditionsadoptedwereHP-1column（30m×0.32mm×0.25μm）,andthedetectorwasFID.Theinjectortemperaturewas200℃,thedetectortemperaturewas250℃.Thecolumntemperaturerosebyprogram,theinitialtemperaturewaskeptat40℃for10min，thetemperaturewasraisedto150℃attherateof10℃/min,maintainfor8min.RusultsTherewasagoodlinearity（r=0.9976）,theRSDofprecisionwas1.7%,theaveragerecoverywasintherangeof98%～104%.ConclusionThemethodissimple，rapidandofhighsensitivity,itisanavailablemethodforthedeterminationofresidualorganicsolventsinsilkwormpupaextract.
　　
　　【Keywords】headspaceGC；silkwormpupaextract；residualorganicsolvents
　　
　　蚕蛹提取物是一种作用广泛、不良反应较少的天然药物，其主要药理作用是保护肝脏、增强机体免疫功能等[1]。同时，蚕蛹提取物被广泛作为保健食品原料药。蚕蛹提取物由蚕蛹经水解并分离纯化制得，在生产过程中使用了无铅汽油脱脂，其主要含有烷烃类化合物及部分芳香族化合物。因此，有必要对蚕蛹提取物中有机溶剂残留量进行检测，以控制产品的质量，树立品牌优势，同时适应国际质量标准要求。本文采用顶空进样毛细管气相色谱法测定蚕蛹提取物中有机溶剂的残留量，方法简便快捷，分析结果令人满意。现报告如下。
　　
　　1仪器、试剂及样品
　　
　　Agilent6890N型气相色谱仪；Agilent7694顶空进样器；Agilent化学工作站（A.09.01版）；FID检测器。
　　
　　二甲基甲酰胺为色谱纯；97#无铅汽油为市售；蚕蛹提取物由浙江得恩德制药有限公司提供，批号分别为0402301、0402302、0402303。
　　
　　2检测方法
　　
　　2．1顶空条件因二甲基甲酰胺沸点较高，且对极性小的成分溶解度较好，为保证较高的灵敏度，设定顶空瓶的加热温度为85℃，平衡时间为45min。
　　
　　2．2色谱条件与系统适用性试验HP-1弹性石英毛细管色谱柱（30m×0.32mm×0.25μm）。汽化室温度200℃，检测器温度250℃；氮气为载气，分流比为0.2∶1。柱温为程序升温：起始温度为40℃，保持10min，以10℃/min的速率升温至150℃，保持8min。
　　
　　2.3对照品溶液配制精密称取汽油对照品适量，加70%N,N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液配置成浓度约为20μg/ml的溶液，精密量取此溶液5ml置顶空瓶中，加盖密封，按上述色谱条件进样，色谱图见图1。在所得的色谱图中，各组分峰的理论塔板数均大于3000，各个相邻峰的分离度均大于1.5。
　　
　　2.4．1标准曲线的制备与线性范围精密吸取汽油对照品溶液分别制成5.156、10.312、15.468、20.625、25.780μg/ml的溶液，进行顶空分析，按上述色谱条件进行，测定峰面积。因汽油为混合物，故以峰面积总和进行计算，以峰面积总和为纵坐标（Y），以浓度为横坐标（X）作线性回归，得直线方程为Y=10.049X-10.310，r=0.9976。结果表明：浓度在5～25μg/ml范围内线性关系良好。
　　
　　2.4．2精密度试验取20μg/ml对照品溶液，平行测定5份，记录色谱图，结果峰面积的RSD为1.7%。
　　
　　2.4．3最低检测限试验用对照品溶液（5.156μg/ml），采取逐步稀释法,按上述色谱条件进行，以汽油中一主峰计算信噪比。结果信噪比为3.6时，最低检测限为26.3ppm。
　　
　　2.4．4回收率试验精密称取0402301批样品约0.05g，置10ml顶空瓶中，精密量取对照品溶液（25.78μg/ml）5ml置顶空瓶中，加盖密封，按上述色谱条件进样测定，计算回收率，结果见表1。表1回收率试验结果
　　
　　2.4．5样品测定精密称取3批蚕蛹提取物样品，各约0.1g，置10ml顶空瓶中，精密加入70%二甲基甲酰胺溶液5ml溶解，加盖密封。因无铅汽油为多种成分的化合物，其主要含有烷烃类化合物及部分芳香族化合物，其限度无明确规定，以正己烷和甲苯为指标，参考中国药典2005年版附录ⅧP[2]中残留溶剂的要求，正己烷和甲苯分别为0.029%、0.089%，同时根据样品测定结果暂定本品含汽油不得过0.015%。按上述色谱条件进样，以外标法计算，即得。结果3批均未检出有机溶剂残留。
　　
　　3讨论
　　
　　3.1色谱条件的选择由于汽油成分较复杂，笔者比较了HP-1毛细管色谱柱、HP-5毛细管色谱柱、HP-50 毛细管色谱柱和DB-624毛细管色谱柱来测定有机溶剂残留量时，发现HP-1毛细管色谱柱分离最理想，各组分达到良好的分离度和柱效。
　　
　　3.2溶剂的选择由于汽油极性较小，蚕蛹提取物极性相对较大，采用二甲基甲酰胺作为溶剂时，对照品溶解度较好，而样品较难溶解，为保证对照品溶液与样品溶液具有相同的介质，比较了不同比例的二甲基甲酰胺溶液，结果发现采用70%二甲基甲酰胺溶液对对照品及样品均有较好的溶解度，故选用70%二甲基甲酰胺溶液作溶剂。