标题用反相高效液相色谱法测定炎可宁中黄芩苷的含量

目的测定炎可宁中有效成分-黄芩苷的含量。方法反相高效液相色谱法：色谱柱为KromasilC18（4.6mm×150mm,5μm）；流动相为甲醇-水-磷酸（60∶40∶0.2）；检测波长：280nm；流速：1.0ml?min-1；柱温：30℃。结果建立了对炎可宁片中黄芩苷进行定量的测定方法，并将此方法用于3个不同厂家生产的炎可宁片中黄芩苷含量的测定。结论为中药复方提供了更加简便、合理、可靠的质控方法。
　　
　　炎可宁为国家准字号中成药，由黄连、黄柏、板蓝根、大黄、黄芩等5味中药组成，主要用于清热泻火，消炎止痢。作为处方中的主药黄芩性苦寒，具有清热燥湿，泻火解毒，止血安胎的作用，所含黄芩苷一种黄酮类化合物，有抗炎、抗菌、解热等作用。以黄芩苷为定量监控指标可有效地控制产品质量。有关黄芩苷的含量测定方法有比色法、分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等。在《中国药典》中对炎可宁中黄芩苷含量的测定还没有记载，本文研究了利用反相高效液相色谱法测定了3个不同厂家生产的炎可宁片中黄芩苷的含量。本法具有操作简单、准确、重现性好等优点，同时也为中药复方提供了更加简便、合理、可靠的质控方法。
　　
　　1、仪器与试剂
　　
　　美国Waters公司高效液相色谱仪（带有Waters1525液相泵，Waters2996二极管阵列检测器），超声波清洗器（KQ-250A，昆山市超声波仪器厂），上皿电子天平（FA2004，上海天平仪器厂），TG328B分析天平（上海天平仪器厂），低速离心机（北京医用离心机厂）。
　　
　　对照品：黄芩苷（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。炎可宁片（市售），甲醇（天津市光复精细化工研究所，色谱纯），无水乙醇（沈阳新兴试剂厂，分析纯），甲醇（沈阳市合富化学试剂经销厂，分析纯）高锰酸钾（丹东市胜利化工厂），二次蒸馏水（自制）。
　　
　　2、方法与结果
　　
　　2.1溶液的制备对照品溶液的制备：精密称量干燥至恒重的黄芩苷对照品25mg置于50ml容量瓶中，用50％甲醇进行溶解，并超声处理20min，水浴（50℃）10min，冷却至室温，再用50％甲醇定容至50ml，摇匀，即得0.5mg/ml的黄芩苷贮备液。准确吸取贮备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml，分别置于10ml容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，所得对照品的浓度分别为25，50，100，150，200μg/ml。样品溶液的制备：精密称取除去糖衣的3个厂家的炎可宁样品，加入甲醇30ml，超声处理20min，放置至室温，再用离心机以3500r/min的速度离心15min，取离心液5.0ml，用甲醇稀释至10ml，即得样品溶液。
　　
　　2.2色谱和检测条件色谱柱：KromasilC18分析柱（4.6mm×150mm,5μm）；流动相：甲醇水磷酸（60∶40∶0.2）；检测波长：280nm；流速：1.0ml?min-1；柱温：30℃；进样体积：10μl。
　　
　　2.3线性关系的考察在上述条件下，黄芩苷分别在5个浓度点，平行测定3次（均进样10μl）。以峰面积为纵坐标，对照品浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线如图2所示；回归方程为：C=2.9869×10-5A 4.08875,r=0.9995；黄芩苷在25～200μg/ml范围内呈良好的线性关系。
　　
　　2.4精密度实验精密吸取黄芩苷对照品溶液，重复进样5次，每次进样体积为10μl。测定峰面积分别为：5613129，5684194，5537458，5736715，5665029，5647305。RSD为1.3%。
　　
　　2.5回收率试验取已知含量的样品溶液1.0ml，分别加入对照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml，按样品测定法，用上述色谱条件测定，表明回收率良好，满足定量要求。
　　
　　2.6样品中黄芩苷含量测定将样品溶液经0.45μm滤膜过滤直接进样，分别定量测定黄芩苷的含量。