标题高效液相色谱法测定排石利胆片中芍药苷的含量

目的建立排石利胆片中芍药苷含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱：HypersilODS-3C18（4.6mm×150mm,5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（18∶82）；检测波长为230nm,流速1.0mL/min。结果芍药苷在0.06～0.36μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r＝0.9999,平均回收率为99.77%,RSD＝1.35%（n＝6）。结论该方法简单、快速、准确,可用于该制剂中芍药苷的质量控制。
　　
　　【关键词】排石利胆片；芍药苷；高效液相色谱法；含量测定
　　
　　Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofpaeoniflorininPaishilidantabletsbyHPLC.MethodHypersilODS-3C18column（4.6mm×150mm,5μm）wasused,acetonitrile-0.1%phosphoricacid（18∶82）wasthemobilephase,detectionwavelengthwasat230nm,andtheflowratewas1.0mL/min.ResultThelinearrangeofpaeoniflorinwas0.06～0.36μg,r＝0.9999,andtheaveragerecoverywas99.77%withRSDof1.35%（n＝6）.ConclusionThemethodwassimple,quickandaccurate,andavailableforqualitycontrolofthepreparation.
　　
　　Keywords：Paishilidantablets；paeoniflorin；HPLC；contentdetermination
　　
　　排石利胆片由茵陈、柴胡（醋炙）、金钱草、龙胆、赤芍、郁金、蒲黄、大黄、五灵脂、芒硝10味中药组成,具有舒肝理气、排石利胆功能,用于治疗胆囊炎、胆石症,原方收载于《卫生部药品标准?中药成方制剂》第20册。张氏[1]报道了高效液相色谱（HPLC）法测定排石利胆颗粒中龙胆苦苷的含量。李氏等[2]报道了排石利胆片中绿原酸的含量测定方法。目前未见对其中芍药苷含量测定的报道。为确保制剂质量,我们建立了HPLC法测定排石利胆片中芍药苷含量的方法,现报道如下。
　　
　　1仪器与试药
　　
　　岛津10A-vp高效液相色谱仪,SPD-ML0Avp二极管阵列检测器,ShimadzuCLASS-VP色谱工作站。岛津UV-1601紫外-可见光分光光度计。AS3120A型超声波清洗器。芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所,批号110736-200732）,排石利胆片为陕西合生医药研究所剂型研发制剂,批号20090805、20090807、20090811。乙腈（色谱纯）,纯化水,其他试剂为分析纯。
　　
　　2方法与结果
　　
　　2.1色谱条件
　　
　　色谱柱：HypersilODS-3C18（150mm×4.6mm,5μm）,流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（18∶82）,检测波长为230nm,流速1.0mL/min。理论塔板数按芍药苷色谱峰计应不低于3000。芍药苷与其他组分完全分离。
　　
　　2.2溶液的制备
　　
　　2.2.1对照品溶液取芍药苷对照品适量,加甲醇制成含芍药苷0.024mg/mL的溶液。
　　
　　2.2.2供试品溶液将供试品研为细粉,取约0.9g,精密称定,置50mL容量瓶中,加甲醇约40mL,摇匀,超声（120W,40kHz）处理30min,放至室温,加甲醇至刻度,摇匀,微孔滤膜（0.45μm）滤过,即得。
　　
　　2.2.3阴性对照溶液按处方比例称取缺赤芍的药材,按照排石利胆片生产工艺制备后作为阴性样品,按“2.1.2”项下方法制成阴性对照溶液。
　　
　　2.3干扰试验
　　
　　精密量取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL注入液相色谱仪,记录色谱图。对照品溶液与供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰,阴性样品对测定无干扰（见图1）。
　　
　　AB
　　
　　C
　　
　　注：A.对照品；B.供试品；C.阴性对照
　　
　　图1排石利胆片HPLC图谱
　　
　　2.4线性关系的考察
　　
　　分别精密吸取对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μL注入液相色谱仪中,按上述色谱条件进行测定。以进样量X为横坐标,色谱峰面积Y为纵坐标,经线性回归,得回归方程：Y＝1.724×106X－1.060×104,r＝0.9999。结果表明,芍药苷在0.06～0.36μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
　　
　　2.5精密度试验
　　
　　精密吸取同一对照品溶液10μL,连续进样5次,测定芍药苷的峰面积,结果RSD＝1.67%（n＝5）。
　　
　　2.6重复性试验
　　
　　取同一批样品（批号20090805）5份,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,进样10μL,结果芍药苷平均含量为4.92mg/g,RSD＝1.45%（n＝5）。
　　
　　2.7稳定性试验
　　
　　精密吸取同一供试品溶液10μL,分别于0、2、6、12、24h进样测定,结果RSD＝1.70%（n＝5）,表明供试品溶液至少在24h内稳定。
　　
　　2.8加样回收率试验
　　
　　精密称取已知含量样品（4.92mg/g）6份,分别精密加入芍药苷对照品甲醇溶液（浓度为2.40mg/mL）1mL,再按供试品溶液制备方法制备,进样10μL,测定计算回收率。结果见表1。
　　
　　表1加样回收率试验结果（n＝6）
　　
　　称样量
　　
　　（g）供试品含
　　
　　量（mg）加入量
　　
　　（mg）测得量
　　
　　（mg）回收率
　　
　　（%）平均回收
　　
　　率（%）RSD
　　
　　（%）
　　
　　0.47552.342.404.7399.65
　　
　　0.48602.392.404.81100.83
　　
　　0.48252.372.404.7498.6399.771.35
　　
　　0.49252.422.404.8299.91
　　
　　0.48622.392.404.83101.62
　　
　　0.47552.342.404.7399.65
　　
　　2.9样品含量测定
　　
　　按供试品溶液制备方法制备供试液,进样10μL测定,照外标法计算样品中芍药苷含量,结果见表2。
　　
　　表2芍药苷含量测定结果
　　
　　批号芍药苷含量（mg/g）
　　
　　200908054.92
　　
　　200908074.25
　　
　　200908114.26
　　
　　3讨论
　　
　　经对芍药苷紫外扫描,在230nm处有最大吸收,因此,检测波长选取230nm。
　　
　　供试品溶液的制备我们先考察了热回流法,结果随着时间增加,含量有降低趋势。这可能与芍药苷对热不稳定有关[3]。因此选用超声提取法。在提取时间上,考察了超声处理15、30、45min,结果超声30min时含量较高。在供试品溶液制备中分别考察了50%乙醇、甲醇超声30min提取,结果两者含量无明显差异,但50%乙醇提取液色谱基线杂质峰较多,因此,供试品溶液制备采用甲醇提取。