标题Western Blot实验所用到的基本试剂

1、 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%（w/v）0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。
2、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热（以利于溶解双丙稀酰胺）的去离子水配制含有29%（w/v）丙稀酰胺和1%（w/v）N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。）储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。
3、 浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL（pH6.8）:6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用 Tris.CL。
4、 分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL（pH8.8）:18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。
5、 SDS- PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS 12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O 32ml混匀备用。按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。
6、 TEMED原溶液N，N，N’N’四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时，聚合反应受到抑制。10%（w/v）过硫酸胺溶液。提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml，临用前配制.
7、 转移缓冲液：配制1L转移缓冲液，需称取2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37g SDS，并加入200ml甲醇，加水至总量1L。
8、 Tris-甘氨酸电泳缓冲液:30.3gTris，188g甘氨酸，10gSDS，用蒸馏水溶解至1000ml，得0.25mol/L Tris-1.92mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释10倍。
9、 脱脂奶粉5%（w/v）。
10、 丽春红染液储存液：丽春红S 2g 三氯乙酸30g 磺基水杨酸 30g 加水至100ml 用时上述储存液稀释成10倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。
11、 Tris缓冲盐溶液（TBS）:20mmol/LTris/HCL（pH7.5），500mmol/LnaCl。
12、 NaN3 0.02% 叠氮钠（有毒，戴手套操作），溶于磷酸缓冲盐溶液（PBS）。
13、 过氧化物酶标记的第二抗体。
14、 Tween20（15）鼠抗人-MMP-9（16）鼠抗人-TIMP-1。
15、 BCIP（溶于100%二甲基甲酰胺，50mg/ml）。
16、 NBT（溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml）。
17、 100mmol/L NaCl。
18、 100mmol/LTris-HCL（pH9.5）。
19、 50mmol/LTris-HCL（pH7.5），5mmol/L EDTA。