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培养基的配置:
(1)混合培养基中的各成分。先量取大量元素母液,再依次加入微量元素母液、铁盐母液、有机成分,然后加入植物激素及其他附加成分。
(2)溶化琼脂。称取应加的琼脂和蔗糖,将琼脂浸泡到透明后,用蒸馏水加热烧开熔化琼脂,待琼脂完全溶化后,把1加入,用pH试纸测pH值,并用0.1mol的NaOH或HCl调pH为5.6-5.8,最后加水定容至所需体积。
(3)分装。将熬好的培养基分装于培养瓶中,分装时注意不要把培养基倒在瓶口上,以防引起污染,然后用封口膜或瓶盖封口。
(4)灭菌。由于培养基内有丰富的营养物质,极利细菌和真菌繁殖,造成污染,影响组培的成功,一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。⒈高温高压消毒:一般用消毒锅消毒,注意消毒锅不能装的过满,采用三次放气灭菌法,即0.05Mpa下放三次气,在0.1Mpa维持15-20分钟。⒉过滤消毒:一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高温高压法消毒,可用过滤消毒,可过滤消毒后再加入已高温高压消毒的培养基中,过滤消毒应在无菌室或超净工件台上进行,以避免污染培养基。
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