标题反相高效液相色谱法测定咪唑斯汀片含量

摘要：目的：建立咪唑斯汀片的含量测定方法方法：采用反相高效液相色谱法，色谱柱为C18，检测波长为285nm，流动相为0.025mol／L磷酸二氢钾缓冲液-乙腈（72：28），流速为0.5ml／min、结果：咪唑斯汀检测浓度在4.16～416μg／ml范围内线性关系良好（r=0.9998），平均加样回收率为99.98%（RSD=0.44%，n=3）。结论：本法可用于咪唑斯汀片的含量测定，且操作简便、结果准确。
　　
　　关键词：反相高效液相色谱法；咪唑斯汀片；含量测定
　　
　　咪唑斯汀主要用于治疗成人或12a以上儿童的季节性或常年性过敏性鼻炎及荨麻疹等过敏性症状，具有独特的抗组胺及其它炎症介质的作用，为强效和高度选择性的H1受体拮抗剂，且在抗组胺用药剂量下没有抗胆碱、镇静以及血管方面的副作用，因此，较其它抗组胺类药物具有更大的优势。其化学名称为2-[[[1-[（4-氟苯基）甲基]-1氢-苯并咪唑-2-基]-4-哌啶基]甲基-氨基]-4（3氢）-嘧啶酮。目前，其质量标准在国内、外药典中均未收载，国内也尚未见有以高效液相色谱（HPLC）法测定该药含量的报道，故笔者根据国外有关文献报道，建立了其片剂的含量测定方法。
　　
　　l仪器与试药
　　
　　1.1仪器
　　
　　LC900高效液相色谱系统，包括PU一980型智能泵UV-975型紫外检测器、100%5手动进样阈（日本Jasco公司）；L-200SM十万分之一光电天平（日本Jasco公司）；TDx高速离心机（美国雅培公司）；pHS-3C型pH仪（上海雷磁仪器厂）。
　　
　　1.2试药
　　
　　咪唑斯汀对照品（北京万全德众有限公司，批号：03021011，纯度：99.95%）；咪唑斯汀片（法国圣德拉堡公司，批号：030818587、030818687、031129994）；乙腈、乙醚、甲醇均为色谱纯；磷酸二氢钾、磷酸为分析纯。
　　
　　2方法与结果
　　
　　2.1色谱条件
　　
　　色谱柱：HiQsilCl8（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.025mol／L磷酸二氢钾缓冲液-乙腈（72：28），磷酸调pH至2.58，并经0.22μm微孔滤膜滤过后使用；检测波长：285nm；柱温：室温；流速：0.5ml／min；进样量：2μl。
　　
　　2.2溶液的制备
　　
　　2.2.1对照品溶液的制备：准确称取咪唑斯汀对照品10mg，置于100ml容量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，即得。
　　
　　2.2.2样品溶液的制备：取本品20片（批号：030818687），准确称定，研细。再准确称取适量（约相当于咪唑斯汀10mg），置于100ml容量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，即得。
　　
　　2.3方法专属性考察
　　
　　对咪唑斯汀、溶剂及辅料进行HPLC分离检测。采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定咪唑斯汀含量的方法专属性好。
　　
　　2.4线性关系考察
　　
　　采用加重法准确称取咪唑斯汀对照品适量（0.00416g），置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为416μg／ml咪唑斯汀标准贮备液。精密吸取上述溶液各0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0ml，分别置于1Oml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。按“2.1”项下色谱条件，分别进样20μl，记录峰面积。结果表明，咪唑斯汀保留时间为13.4min，理论塔板数为2392，均符合《中国药典》2000年版的规定，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，咪唑斯汀浓度（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=8.2343×10000X-9.2599×1000（r=0.9998）表明咪唑斯汀对照品溶液检测浓发4.16-416μg／ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
　　
　　2.5最低检测限
　　
　　按“2.1”项下色谱条件，以信噪比为3作指标，测定最低检测限。结果表明，浓度为13.87ng／ml的咪唑斯汀对照品溶液进样20μl，其信号约为噪占的3倍，即最低检测限为0.2100%ng。
　　
　　2.6精密度试验
　　
　　精密吸取“2.2.2”项下溶液20μl，按一2.1”项下色谱条件连续进样5次，结果样品含量的相对标准为0.56%（n=5）。
　　
　　2.7重现性试验
　　
　　收同一批样品（批号：030818687.约相当咪唑斯汀5mg）6份，准确称定，并按“2.10”项下方法测定眯唑斯汀的含量。结果样品含量的相对标准差为0.68%，表明本法现性较好
　　
　　2.8稳定性试验
　　
　　取“2.2.2”项下溶液，于室温下放置0、2、4、6、12、24、48h，分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，峰面积值基本不变，其积分值的卡甘列标准差为1.22%，表明样品在48h内可保持稳定。
　　
　　2.9加样回收率试验
　　
　　称取已知含量的样品适量（批：030818687，约相当于咪唑斯汀5mg）共9份，准确称定，置于1O0ml容量瓶中，分别加入咪唑斯汀对照品4、5、6mg（各3份）。用甲醇溶解并稀释至客刻度，摇匀后按“2.10”项下方法分别测定含量，并计算回收率。
　　
　　2.10样品含量测定
　　
　　分别取3批咪唑斯汀片（各3份）。按“2.2.2”项方法制备样品溶液，并按“2.1”项色谱条件各进样20μl，记录峰面积，按外标法以峰面积计算样品中咪唑斯汀的含量。
　　
　　3讨论
　　
　　笔者曾号察流动卡upH值分别为2.5、2.58、3.2时对色谱行为的影响.结果发现当pH值为2.5时，主峰保留时间缩短，似邻杂质峰对主峰影响较大；当pH值为3.2时，主峰保留时间延长但峰形不好；而选择pH值为2.58（±0.02）时，保留时间和峰形较为适宜。
　　
　　笔者曾配制乙腈比例分别为35%、28%、20%的流动相以号察乙腈比例对色谱峰的影响。结果表明，流动相中乙腈比例时，峰及栩邻杂质峰的保留时间影响较大；当乙腈比例为35%时，主峰保留时间缩短且相邻杂质峰对主峰影响较大；当乙腈比例为20%时，木出现主峰；而采用乙腈比例为28%的流动相则较为适宜。
　　
　　按紫外分光光度法在200nm～400nm波长范围对咪唑斯汀进行扫描.结果表明，其在288nm处有最大吸收。但笔者最终选择285nm为测定波长.是因其在此波长处灵敏度较好，不仅如此，测定时其基线噪声低且稳定。
　　
　　由于不清楚详细的处方及有关辅料，故本试验没有没空白试验，回收率试验则采用加样回收的方法。