标题山萘酚胃漂浮胶囊释放度的高效液相色谱法测定

【摘要】目的建立高效液相色谱（HPLC）法测定山萘酚胃漂浮胶囊的释放度。方法采用HypersilODS（4.6mm×150mm,5μm）色谱柱，流动相甲醇-4‰醋酸溶液（48∶52），流速为0.8ml·min-1，检测波长360nm，柱温45℃。结果线性范围在5.0～40.0μg·ml-1范围内线性关系良好，方法回收率为100.49%，RSD为2.10%（n=9），精密度良好。结论该方法灵敏、准确、专属性强，用于山萘酚胃漂浮胶囊释放度测定结果满意。
　　
　　【关键词】山萘酚;胃漂浮胶囊;释放度;高效液相色谱
　　
　　山萘酚胃漂浮胶囊是贵州大学贵州省生化工程中心开发研究的抗胃癌靶向中药新制剂，其主药山萘酚对多种肿瘤细胞有抑制作用，特别是对胃癌的治疗方面近年来已取得较多的进展，如：山萘酚可通过下调凋亡抑制基因bc1-2表达来诱导胃癌细胞凋亡，从而发挥抑制肿瘤生长转移作用[1]，山萘酚的摄入能够降低西班牙人胃癌的发病率[2]。将山萘酚制成胃漂浮胶囊剂，可以延长药物在胃内的滞留时间，减少给药次数，延长山萘酚的吸收，提高生物利用度和靶向性治疗胃癌。为了更好地确保该药的质量，我们采用HPLC法，对山萘酚的体外释放度进行含量测定，为评价和控制该药的质量提供了依据。
　　
　　1仪器与村料
　　
　　1.1仪器1100型HPLC仪（美国Agilent公司），色谱柱为依利特C18柱（4.6mm×150mm,5μm），DV215CD型电子分析天平（上海奥豪斯公司），ZRS-8G型智能溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）。
　　
　　1.2试剂及药品山萘酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为：110861-200808），甲醇（色谱纯），醋酸（分析纯），水为重蒸水。山萘酚胃漂浮胶囊（贵州大学贵州省生化工程中心研制，批号：20080301，20080303，20080305）。
　　
　　2方法与结果
　　
　　2.1色谱条件色谱柱为HypersilODS色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）;流动相为甲醇-4‰醋酸溶液（48∶52）;检测波长360nm;流速0.8ml·min-1;柱温45℃。
　　
　　2.2专属性实验按处方比例称取辅料，加人工胃液（0.1mol·L-1盐酸溶液）制得相当于30.0μg·ml-1山萘酚浓度的空白辅料溶液，滤过，精密量取20μl注入色谱仪，记录色谱峰，见图1a。另将一粒空白胶囊壳溶于900ml人工胃液（0.1mol·L-1盐酸溶液）中，滤过，精密量取续滤液20μl注入色谱仪，记录色谱峰，见图1b。精密称取山萘酚对照品5.0mg，置于50ml量瓶中，加甲醇振摇超声溶解，冷却后定容，得到质量浓度为0.1mg·ml-1的储备液，精密量取储备液3ml置于10ml量瓶中，加人工胃液（0.1mol·L-1盐酸溶液）稀释至刻度，得含山萘酚30μg·ml-1的溶液，精密量取续滤液20μl注入色谱仪，记录色谱峰（见图1c）。计算得山萘酚的理论塔板数为4300，拖尾因子为1.0。a-空白辅料b-空白囊壳c-对照品1.山萘酚图1HPLC图
　　
　　2.3标准曲线的制备精密量取上述储备液适量，置于10ml量瓶中，加人工胃液（0.1mol·L-1盐酸溶液）稀释至刻度，摇匀，分别得到质量浓度为5.0，10.0，20.0，30.0，40.0μg·ml-1的系列标准溶液，精密吸取各系列标准溶液20μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以药物浓度对峰面积进行线性回归，得到山萘酚的线性回归方程为：Y=19.611X 22.97（r=0.9997）。结果表明山萘酚质量浓度为5.0～40.0μg·ml-1内呈良好的线性关系。
　　
　　2.4回收率实验分别精密称取山萘酚原料适量，加入处方比例辅料，用人工胃液（0.1mol·L-1盐酸溶液）配制标示量质量分数为50%、80%、100%的供试品溶液，分别精密量取供试品续滤液各20μl进样，记录峰面积，按“2.3”项的回归方程计算回收率。结果见表1。表1回收率实验结果
　　
　　2.5重复性实验取浓度约为30.0μg·ml-1的山萘酚溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，结果RSD值为1.8%。
　　
　　2.6稳定性实验取以上溶液于室温、阳光不直射的情况下放置，分别在0，2，4，8，10h精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱峰面积变化在2.0%范围内，表明溶液在10h内稳定。
　　
　　2.7释放度实验方法参照《中国药典》（2005年版），采用转篮法测定山萘酚胃漂浮胶囊的体外释放度。以900ml人工胃液（0.1mol·L-1盐酸溶液）为溶出介质，转速为100r·min-1，依法操作。取样点时间为1.0，2.0，4.0，6.0，8.0h。分别取5ml溶液，用0.45μm微孔滤膜过滤，并及时补充5ml介质。分别精密量取续滤液各20μl进样，记录峰面积。按“2.3”项的回归方程计算累计释放量。
　　
　　2.8释放度均一性实验取山萘酚胃漂浮胶囊一批共36粒，分别6次按实验方法测定释放度。结果见表2。结果表明山萘酚胃漂浮胶囊释放均一性良好。表2释放度均一性实验结果
　　
　　2.9释放度测定结果取山萘酚胃漂浮胶囊3批样品，照上述释放度测定方法测定释放度（见图2）。结果表明3批山萘酚胃漂浮胶囊在8h时的累计释放平均值达80%以上，符合《中国药典》释放度要求。图2释放度测定结果
　　
　　3讨论
　　
　　本方法测定的山萘酚胃漂浮胶囊的凝胶骨架材料为羟丙甲基纤维素和海藻酸钠，两种辅料均不干扰测定，且具有较适宜的水化速率和溶蚀速率，故漂浮和缓释性能较好。在实验过程中我们对不同颜色、不同厂家、不同批号的胶囊壳，在360nm处进行了吸收度测定，发现其吸收值各不相同，尤其是不同颜色的胶囊壳吸收值差别更大。本文通过方法学考察建立了HPLC法测定山萘酚胃漂浮胶囊的释放度，本方法灵敏、准确、专属性强，能够更好的控制山萘酚胃漂浮胶囊制剂的质量，也可用于山萘酚其它制剂的释放度测定。