标题紫外分光光度法检测保健食品中大豆异黄酮的含量

【摘要】目的：以大豆苷元为标准品，用紫外分光光度法检测三种市售保健品中大豆异黄酮总浓度.方法：保健品用甲醇 水（80 20,V/V）在70℃超声提取40min，以大豆中的活性成分大豆苷元为标准品，检测波长254nm，计算样品含量.结果：回归方程为Y=0.138X-0.0056，R2=0.9994,线性范围：0.8～6.4mg/L,平均回收率为99.32%,RSD=0.044%.结论：本方法适用于检测保健食品中大豆异黄酮含量.
　　
　　【关键词】保健食品；大豆异黄酮；大豆苷元；紫外分光光度
　　
　　0引言
　　
　　大豆异黄酮含量测定的方法很多［1］，主要有高效液相色谱法（HPLC），高效液相色谱质谱法（HPLCMS）、气相色谱法（GC）和毛细管电泳法.我们采用的紫外分光光度法与其它方法相比，简便快捷，且对仪器设备要求不高，目前用此方法测定保健食品中大豆异黄酮含量少见报道.
　　
　　1材料和方法
　　
　　1.1材料
　　
　　TU9100型紫外分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；TU1800紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；RE52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），KQ100型超声机（昆山市超声仪器有限公司）.大豆苷元标准品（中国药品生物制品检定所1502200101）.市售保健品3种：安睡美（华博众生物科技有限公司）；天雌（四川旭化华制药有限公司）；欣靓（华北制药康欣有限公司）.甲醇（分析纯）.氯仿（分析纯）.
　　
　　1.2方法
　　
　　1.2.1保健品中大豆异黄酮提取与分离取保健品4粒，精密称质量，置100mL圆底烧瓶中，加800mL/L甲醇70mL超声提取40min，趁热抽滤,甲醇提取液在35℃减压蒸去甲醇，然后在45℃减压蒸去水，再加入20mL甲醇溶解作为供试品溶液备用.
　　
　　1.2.2大豆异黄酮苷元的检验
　　
　　1.2.2.1薄层色谱用硅胶GF254薄层板，以氯仿无水甲醇（10∶0.5）为展开剂，用标准品和样品点样（无水甲醇溶解），在254nm紫外灯下检测，见图1.
　　
　　1.2.2.2紫外分光光度检测用TU1800紫外可见分光光度计在波段200～400nm条件下分别检测无水甲醇、标准品、样品（图2~6）.
　　
　　2结果
　　
　　2.1标准品溶液的配制及标准曲线的制备［2］精确称取大豆苷元标准品2.0mg，置于25mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻线，摇匀.分别精密吸取标准品溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.6,0.8mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻线，摇匀.以甲醇为空白，在254nm的波长处测定A值.以浓度为横坐标，A值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=0.138X-0.0056，R2=0.9994，线性范围0.8～6.4mg/L.
　　
　　2.2含量测定精确量取供试品溶液0.01mL，用无水甲醇稀释1000倍到10mL定容，用TU9100型紫外分光光度计在波长254nm处测定A值3次，取平均值.测定结果，根据标准曲线计算样品含量（表1）.表1三种样品的含量（略）
　　
　　2.3精密度实验同一供试品溶液（天雌）0.01mL，用无水甲醇稀释1000倍到10mL定容，用TU9100型紫外分光光度计在波长254nm处连续测定6次A值，分别为0.102,0.099,0.100,0.100,0.099,0.096，结果RSD=0.133%，说明仪器精密度较好.
　　
　　2.4加样回收率实验［3］向已知含量的样品（天雌）中加入不同量的大豆苷元标准品，按2.2的方法进行含量测定，计算回收率，结果见表2.回收率的平均值为99.32%，RSD=0.044%，表明方法的回收率较好.表2回收率测定结果（略）
　　
　　3讨论
　　
　　由于配置的供测品使用甲醇为溶剂，大豆异黄酮放置过程中可能有分解，所以进行了稳定性实验.将同一供试品溶液（天雌）每隔30min测定1次A值，6次测定结果分别为0.102,0.099,0.097,0.095,0.096,0.092,RSD=0.25%，表明供试品溶液在3h内稳定.
　　
　　4结论
　　
　　紫外分光光度法测定保健食品中大豆异黄酮含量与其它方法比较简便快捷，对仪器设备要求不高,重现性好,适用于保健食品中大豆异黄酮含量的测定.