标题高效液相色谱法测定复方麻仁丸中大黄素的含量

复方麻仁丸由火麻仁、大黄、芦荟、白芍、枳实等七味中药制成，具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经之功效，我院临床应用多年，治疗大便秘结、习惯性便秘等颇有疗效。本文运用高效液相色谱法对其大黄中的大黄素进行了含量测定，为该制剂的质量控制提供快速准确的测定方法。

1 仪器与试药 

     高效液相色谱仪LC-2100，紫外检测器UV2100，色谱工作站，电子分析天平；超声波清洗器声波仪；大黄素对照品（中国药品生物制品检定所）；复方麻仁丸（30g/瓶）及阴性样品（本院中药制剂室，样品批号：020822，021128，030410）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件 

     色谱柱：C18（4.6mm×250mm，5um）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（80：20：1）；检测波长：254nm；流速：1ml/min；灵敏度：0.02AUFS；柱温：25℃；进样量：20u1；保留时间：13．5分钟；理论塔板数：以大黄素峰计算应不低于3500。

2．2 供试品溶液制备 

     取复方麻仁丸20粒充分研细，精密称取细粉5g，置具塞锥瓶中，加稀盐酸3ml湿润，精密加入甲醇20ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，超声处理30min，放冷。再精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取续滤液5ml置lOml量瓶中，加甲醇至刻度，制成供试品溶液；另取缺大黄的阴性样品同法制得阴性对照液；精密称取经五氧化二磷干燥24h的大黄素对照品12.5mg置5Oml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每ml含大黄素250ug的对照品溶液。

2．3 线性关系考察 

     精密吸取大黄素对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.Om1分别置lOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取以上各浓度溶液及对照品溶液各20u1，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以大黄素峰面积对其浓度进行线性回归，得回归方程A=5.9754×lO000C一8.1135XlO000．R=0.9999（n=6）。结果表明，大黄素进样量在0.5～5.0ug范围内与吸收峰面积值呈良好的线性关系。

2．4 精密度试验 

    精密吸取大黄素对照品溶液（80ug/ml）20ul，分别按上述色谱条件连续重复进样5次，测得大黄素峰面积RSD值为0.99％。

2．5 稳定性试验 

     精密吸取新鲜配制的样品溶液，每隔2h进样20ul，测得峰面积并计算，结果大黄素的日内RSD为1.5％（n=12），表明样品溶液在24h内测定结果稳定。

2．6 重复性试验

     平行称取同一批号（030410）样品6份，按“2．2”供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件进样20ul，测定并计算含量，结果大黄素平均含量为40.50mg/100g，RSD为0.57％。

2．7 干扰试验 

     取阴性样品对照液，按上述色谱条件测定，结果可见，样品色谱中与对照品溶液在相同的保留时间（tR=13.5min）有相似的色谱峰，而阴性样品无此峰，说明复方麻仁丸的其它成分对大黄素的测定无干扰，且样品中大黄素与其它成分峰可达到基线分离，分离度大于1.5。

2．8 加样回收率试验

      精密称取已知大黄素含量的复方麻仁丸（批号030410）细粉约2.5g，共6份，2份为一组，每一组分别加入大黄素对照品溶液（72.6ug/ml、96.8ug/ml、121.0ug/ml）各10ml，按“2．2”供试品溶液项下制备，依上述色谱条件测定大黄素含量并计算回收率。

2．9 样品测定 

     取三个批号的样品，分别按“2．2”项下方法制得供试品溶液，依上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，外标峰面积法计算样品中大黄素的含量。

3 讨论 

3．1 色谱条件选择 

     参考有关文献，对大黄素对照品溶液在200～400nm波长范围内扫描，结果在254nm波长处有最大吸收且灵敏度最高，故选择254nm为检测波长；经多种比例流动相选择，认为甲醇-水-冰醋酸（80：20：1）最佳，此条件下可免除干扰，使样品中的大黄素分离度好，峰形尖锐。

3．2 提取方法研究

     样品提取先后采用了加热回流提取、甲醇24h冷浸、盐酸-甲醇（3：20）超声处理等方法，结果发现盐酸-甲醇（3：20）超声处理30min测得的大黄素含量较高，且操作简便。