标题人抵抗素(Resistin)ELISA试剂盒操作详细-齐一生物现货供应

货号：QY-H10010

英文名称：human Resistin ELISA KIT 

类别：酶联免疫分析检测试剂盒

规格：96T/48T

包装：盒

检测原理：采用双抗夹心法

保质期：六个月

产品保存条件：2-8°C

应用范围：仅供科研研究实验使用

样品形式：血清/血浆/组织匀浆/细胞培养上清/其它生物液体（具体情况请咨询）

本文由专注于提供生物科技服务的齐一生物收集整理标本的采集及保存

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存  过程 中  如有沉淀形成，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3.尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。  检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以 使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

标本要求： 

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

试剂盒组成：

48孔配制：

1. 说明书: 1份

2. 封板膜:  2片（48）

3. 密封袋:  1个

4  酶标包被板: 1×48 (2-8℃保存)

5. 标准品:    0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6. 标准品稀释液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7. 酶标试剂:     3 ml×1瓶(2-8℃保存)

8. 样品稀释液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)

9. 显色剂A液： 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

10 .显色剂B液：  3 ml×1瓶(2-8℃保存)

11 .终止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12. 浓缩洗涤液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

96孔配置：

1.  说明书:1份

2.  封板膜:2片（96）

3.  密封袋: 1个

4.  酶标包被板:1×96 (2-8℃保存)

5.  标准品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.  标准品稀释液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.  酶标试剂: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)

8.  样品稀释液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)

9.  显色剂A液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)

10. 显色剂B液：3 ml×1瓶(2-8℃保存)

11. 终止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12. 浓缩洗涤液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

需要自备的试剂和器材

1.37℃恒温箱。

2.标准规格酶标仪。

3.精密移液器及一次性吸头

4.蒸馏水，

5.一次性试管

6.吸水纸

操作步骤

1、标准品的稀释：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为9mmol/L，6 mmol/L，3 mmol/L，1.5mmol/L， 0.75 mmol/L）。

2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4、配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7、温育：操作同3。

8、洗涤：操作同5。

9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 

10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

注意事项：

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

底物请避光保存。

严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

本试剂不同批号组分不得混用。

如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
具体咨询：齐一生物销售热线：18121453965  QQ：741653262或咨询在线客服,或者以邮件形式发至 qiyibio@163.com仅供科研使用.齐一生物提供技术服务和检测服务

齐一生物科技（上海）有限公司，专业从事生物产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程技术公司！为广大科研工作者、企业和学校提供质优价廉的实验室用品，本公司主要经营ELISA酶联免疫检测试剂盒、进口原装ELISA试剂盒、分子生物学检测试剂盒、免疫学检测试剂盒、各品牌原装进口抗体抗原、细胞菌株、生物培养基、生化试剂、实验耗材等多门类上万余种科研试剂产品！产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域！已迅速发展成为国内科学试剂的国际运营商之一，是国家重点实验室指定供应商，并与国内多家科研单位紧密合作。产品已被中国科学家使用后在国际顶尖期刊<Cell>、<Nature>、<PNAS>、<Immunity>等上发表文章数