标题小鼠血管生成素，小鼠血管生成素2（Ang-2）试剂盒使用说明书

检测范围：96T
1μg/L -16μg/L

使用目的：
        本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中血管生成素2（ang-2）含量。
小鼠血管生成素，小鼠血管生成素2（Ang-2）试剂盒实验原理
        本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠血管生成素2（Ang-2）水平。用纯化的小鼠血管生成素2（Ang-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加血管生成素2（Ang-2），再与HRP标记的血管生成素2（Ang-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管生成素2（Ang-2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠血管生成素2（Ang-2）浓度。
小鼠血管生成素，小鼠血管生成素2（Ang-2）试剂盒试剂盒组成
        1 20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液3ml×1瓶
        2 酶标试剂3ml×1瓶8 标准品（32μg/L）0.5ml×1瓶
        3 酶标包被板12孔×4条9 标准品稀释液1.5ml×1瓶
        4 样品稀释液3ml×1瓶10 说明书1份
        5 显色剂A液3ml×1瓶11 封板膜2张
        6 显色剂B液3ml×1/瓶12 密封袋1个
标本要求
       1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
       2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠血管生成素，小鼠血管生成素2（Ang-2）试剂盒操作步骤
       1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16μg/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
8μg/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
4μg/L 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
2μg/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1μg/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

         2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
        3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
        4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
        5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
        6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
        7. 温育：操作同3。
        8. 洗涤：操作同5。
        9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
       10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
       11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。