标题科研人囊虫病抗体（CYT--Ab）酶联免疫分析试剂盒操作步骤

本试剂盒仅供研究使用。

实验原理：

本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中人囊虫病抗体（CYT-Ab）。用纯化的病抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中囊虫病抗体（CYT-Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人囊虫病抗体（CYT-Ab）的存在与否。

人囊虫病抗体（CYT－－Ab）酶联免疫分析试剂盒组成：

120倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液3ml×1瓶

2酶标试剂3ml×1/瓶8阳性对照0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×4条9阴性对照0.5ml×1瓶

4样品稀释液3ml×1瓶10说明书1份

5显色剂A液3ml×1瓶11封板膜2张

6显色剂B液3ml×1瓶12密封袋1个

标本要求：

1．标本处理：血清、血浆标本可直接检测

2．标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测，可将标本在-20℃保存一个月，但应避免反复冻融。

3．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

人囊虫病抗体（CYT－－Ab）酶联免疫分析试剂盒操作步骤：

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50µl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将20倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟

10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

人囊虫病抗体（CYT－－Ab）酶联免疫分析试剂盒结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.15

临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品OD值<临界值（CUTOFF）者为人囊虫病抗体阴性

阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者为人囊虫病抗体阳性

注意事项

1．操作严格按照人囊虫病抗体（CYT－－Ab）酶联免疫分析试剂盒说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月