产品缩写：MQCA 版本：2016.1
齐一生物科技（上海）有限公司
喹乙醇代谢物检测试剂盒
使用说明书
（酶联免疫法）
1 原理及用途
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测组织样本中的喹乙
醇代谢物（methyl-3-quinoxaline-2-car-boxylic acid ，
MQCA），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、
标准品及其他配套试剂组成。 检测时， 加入标准品或样品溶液，
样本中的喹乙醇代谢物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗喹
乙醇代谢物抗体，加入酶标记物后，用TMB 底物显色，样本吸
光度值与其所含喹乙醇代谢物含量成负相关，与标准曲线比较
即可得出样本中喹乙醇代谢物的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度：0.3ppb（ng/ml）
2.2 反应模式：25℃，30min～15min
2.3 检测下限：
肌肉………………………………………0.5ppb
猪肝………………………………………1ppb
2.4 交叉反应率：
喹乙醇代谢物（MQCA）………………100%
喹噁啉-2-羧酸（QCA）……………＜1.0%
喹乙醇…………………………………＜1.0%
脱二氧喹乙醇…………………………＜1.0%
喹烯酮…………………………………＜1.0%
脱二氧喹烯酮…………………………＜1.0%
乙酰甲喹………………………………＜1.0%
2.5 样本回收率：
组织…………………………………………85±25%
3 试剂盒组成
酶标板……………………………96孔
标准品（黑盖）：各 1ml
0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb
高标准品（黑盖）：100ppb…………1ml
酶标记物（红盖）…………………11ml
抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml
底物液 A（白盖）……………………6ml
底物液 B（黑盖）……………………6ml
终止液（黄盖）………………………6ml
20X 浓缩洗涤液（白盖）……………40ml
2X复溶液（黄盖）…………………50ml
说明书………………………………1 份
4 需要的器材和试剂
4.1
仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡
器、离心机、刻度移液管、天平（感量 0.01g）
4.2 微量移液器： 单道 20µl-200µl， 100µl-1000µl、 多道300µl
4.3 试剂：乙酸乙酯、浓盐酸、NaCl、正己烷
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知：
实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实
验结果。
5.2 配液：
配液 1：1.5M HCl
取浓盐酸 40ml 缓慢加至 280ml 去离子水中，混匀，室温
保存。
配液 2：33.3% NaCl
称取氯化钠 100g加入蒸馏水 300ml，加热溶解，混匀，室
温保存。
配液 3：复溶液
将 2×复溶液用去离子水 2倍稀释，用于样本的复溶，复
溶液在 4℃环境可保存一个月。
5.3 样本前处理步骤：
5.3.1 肌肉（猪、鸡、鱼、虾）样本
1）称取 2±0.05g去除脂肪的匀浆样品，加入乙酸乙酯 8ml，
涡旋5秒使基质分散 （不要涡旋太久， 否则有一定的基质干扰） ，
加入1.5M HCl 4 ml， 涡旋振荡3min， 室温4000r/min离心10min；
（加入乙酸乙酯稍微涡旋之后应立即加入盐酸，并立即涡旋。
否则组织会成为团状，影响提取结果。当加入盐酸涡旋之后，
会出现糊糊状，则为正常状态，持续涡旋 2min 即可。）
2） 取上层乙酸乙酯 5ml于另一离心管中， 加入33.3% NaCl 3ml，
涡旋 30s，静止待分层；
3）取上层乙酸乙酯 4ml于洁净玻璃试管中，于 50-60℃氮气或
空气下吹干；
4）用 1ml正己烷溶解干燥物，涡旋 1min后加 1X复溶液 1ml，
充分混匀，室温 4000r/min以上离心 5min；（若出现太多泡沫
或者胶状物难以取足够的下清液， 请将样品瓶于80℃水浴5min
后再离心。）
5）去除上层有机相，取下层液 50ul用于分析。
样本稀释倍数：1 检测下限：0.5ppb
5.3.2猪肝样本
1）称取 2±0.05g去除脂肪的匀浆样品，加入乙酸乙酯 8ml，
涡旋5秒使基质分散 （不要涡旋太久， 否则有一定的基质干扰） ，
加入1.5M HCl 4 ml， 涡旋振荡3min， 室温4000r/min离心10min；
（加入乙酸乙酯稍微涡旋之后应立即加入盐酸，并立即涡旋。
否则组织会成为团状，影响提取结果。当加入盐酸涡旋之后，
会出现糊糊状，则为正常状态，持续涡旋 2min 即可。）
2） 取上层乙酸乙酯 5ml于另一离心管中， 加入33.3% NaCl 3ml，
涡旋 30s，静止待分层；
3）取上层乙酸乙酯 2ml于洁净玻璃试管中，于 50-60℃氮气或产品缩写：MQCA 版本：2016.1
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空气下吹干；
4）用 1ml正己烷溶解干燥物，涡旋 1min后加 1X复溶液 1ml，
充分混匀，室温 4000r/min以上离心 5min；（若出现太多泡沫
或者胶状物难以取足够的下清液， 请将样品瓶于80℃水浴5min
后再离心。）
5）去除上层有机相，取下层液 50ul用于分析。
样本稀释倍数：2 检测下限：1ppb
6 酶联免疫试验步骤
将所需试剂从 4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min
以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，
每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框
架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于 2-8℃。
实验开始前，用去离子水将 20×浓缩洗涤液按20倍稀释
成工作洗涤液。
6.1 编 号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本
和标准品做 2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6.2 加样反应：加标准品或样本 50µl/孔到各自的微孔中，然
后加抗体工作液 50µl/孔，轻轻振荡 5秒混匀，25℃避光反应
30分钟。
6.3 洗 涤：将孔内液体甩干，用工作洗涤液250µl/孔充分
洗涤 5次，每次间隔 30秒，最后用吸水纸拍干（拍干后未被
清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
6.4 加酶反应：加酶标记物100µl/孔，25℃避光反应 30分钟。
6.5 洗 涤：同上
6.6 显 色：加底物液 A 50µl/孔，再加底物液 B 50µl/孔，
轻轻振荡 5秒混匀，25℃避光显色 15分钟。
6.7 终 止：加终止液 50µl/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。
6.8 测吸光值：用酶标仪于 450nm处测定每孔吸光度值（建议
用双波长 450/630nm）。测定应在终止反应后 10分钟内完成。
7 结果分析
7.1 百分吸光率的计算
标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸
光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0ppb）的吸光度
值，再乘以 100%，即
百分吸光度值（%）＝ A
×100%
A0
A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
7.2 标准曲线的绘制与计算
以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）
的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分
吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓
度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的
准确、快速分析。（欢迎来电索取）
8 注意事项
8.1 室温低于 25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致
所有标准的 OD值偏低。
8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲
线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行
下一步操作。
8.3 混合要均匀，洗板要彻底，在 ELISA分析中的再现性，很
大程度上取决于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育过程中， 用盖板膜封住微孔板， 避免光线照射。
8.5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试
剂盒中的试剂。
8.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0 标准的吸光
度值小于 0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8.7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。
9 贮藏及保存期
储藏条件：试剂盒于 2-8℃保存，避免冷冻。
保 质 期：该产品有效期为 1年，生产日期见包装盒。
【生产企业】
企业名称：齐一生物科技（上海）有限公司
