标题杂交瘤细胞的冻存与复苏

1．杂交瘤细胞的冻存 及时冻存原始孔的杂交瘤细胞每次克隆化得到的亚克隆细胞是十分重要的。因为在没有建立一个稳定分泌抗体的细胞系时，细胞培养过程中随时可能发生细胞的污染、分泌抗体能力的丧失等等。如果没有原始细胞．的冻存，则可因上述意外而前功尽弃。杂交瘤细胞的冻存方法同其他细胞系一样，原则上海支安瓿含1×106个以上个细胞，但对原始孔的杂交瘤细胞可以因培养环境不同而改变，在24孔培养板中培养，当长满孔底时，1孔就可以装1支安瓿冻存。细胞冻存液为50％小牛血清、40％不完全培养液、10％DMSO。冻存液最好预冷，操作动作轻柔、迅速。冻存时从室温降至0℃后放人一70℃超低温冰箱，次日转入液氮中。也可用细胞冻存装置进行冻存。冻存细胞要定期复苏，检查细胞的活性和分泌抗体的稳定性，在液氮中细胞可保存数年或更长时间。

2．细胞复苏方法 将玻璃安瓿自液氮中小心取出，放37℃水浴中，在Irain内使冻存的细胞解冻，将细胞用完全培养液洗涤两次，然后移人前一天已制备好的饲养层细胞的培养瓶内，置37℃、5％C02孵箱中培养，当细胞形成集落时，检测抗体活性。