标题粗脂肪含量的测定-索氏抽提法

一、目的
脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中,测定脂肪的含量,可以作为鉴别其品质优劣的一个指标.脂肪含量的测定有很多方法,如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等.目前国内外普遍采用抽提法,其中索氏抽提法（Soxhlet extractor method）是公认的经典方法,也是我国粮油分折首选的标准方法.通过本实验的学习,掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法.
二、原理
本实验采用索氏抽提法中的残余法,即用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提,除去样品中的粗脂肪,以样品与残渣重量之差,计算粗脂肪含量.由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外,还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质,因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪.
三、实验材料、主要仪器和试剂
1、实验材料
油料作物种子、中速滤纸
2、仪器：

1）索氏脂肪抽提器（图1）或YG-Ⅱ型油分测定器
2）干燥器（直径15-18cm,盛变色硅胶）
3）不锈钢镊子（长20cm）
4）培养皿
5）分析天平（感量0.001g）
6）称量瓶
7）恒温水浴
8）烘箱
9）样品筛（60 目）
3、试剂
无水乙醚或低沸点石油醚（A.R.）

四、操作步骤
1、准备工作
将滤纸切成8cm×8cm,叠成一边不封口的纸包,用硬铅笔编写顺序号,按顺序排列在培养皿中.将盛有滤纸包的培养皿移入105±2℃烘箱中干燥2h,取出放入干燥器中,冷却至室温.按顺序将各滤纸包放人同一称量瓶中称重（记作a）、称量时室内相对湿度必须低于70%.
2、包装和干燥
在上述已称重的滤纸包中装入3g 左右研细的样品,封好包口,放入105±2℃的烘箱中干燥3h,移至干燥器中冷却至室温.按顺序号依次放入称量瓶中称重（记作b）.
3、抽提
将装有样品的滤纸包用长镊子放入抽提筒中,注入一次虹吸量的1.67 倍的无水乙醚,使样品包完全浸没在乙醚中.连接好抽提器各部分,接通冷凝水水流,在恒温水浴中进行抽提,调节水温在70-80℃之间,使冷凝下滴的乙醚成连珠状（120-150 滴/min 或回流7次/h 以上）,抽提至抽取筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止（约需6-12h）.抽提完毕后,用长镊子取出滤纸包,在通风处使乙醚挥发（抽提室温以 12-25℃为宜）.提取瓶中的乙醚另行回收.
4、称重
待乙醚挥发之后,将滤纸包置于105±2℃烘箱中干燥2h,放入干燥器冷却至恒重为止（记作c）.
五、结果与计算

式中：
a:称量瓶加滤纸包重（g）
b:称量瓶加滤纸包和烘干样重（g）
c:称量瓶加滤纸包和抽提后烘干残渣重（g）
六、附注
1）测定用样品、抽提器、抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理.
这是因为：第一,抽提体系中有水,会使样品中的水溶性物质溶出,导致测定结果偏高；第二,抽提体系中有水,则抽提溶剂易被水饱和（尤其是乙醚,可饱和约2%的水）,从而影响抽提效率；第三,样品中有水,抽提溶剂不易渗入细胞组织内部,结果不易将脂肪抽提干净.
2）试样粗细度要适宜.试样粉末过粗,脂肪不易抽提干净；试样粉末过细,则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失,影响测定结果.
3）索氏抽提法测定脂肪最大的不足是耗时过长,如能将样品先回流1-2 次,然后浸泡在溶剂中过夜,次日再继续抽提,则可明显缩短抽提时间.
4）YG-Ⅱ型油分测定器容量大,适合于样品较多的选种鉴定工作使用,温度控制在70℃左右,8h 可提取完毕.
5）必须十分注意乙醚的安全使用.抽提室内严禁有明火存在或用明火加热.乙醚中不得含有过氧化物,保持抽提室内良好通风,以防燃爆.乙醚中过氧化物的检查方法是：取适量乙醚,加入碘化钾溶液,用力摇动,放置1min,若出现黄色则表明存在过氧化物,应进行处理后方可使用.处理的方法是：将乙醚放入分液漏斗,先以1/5 乙醚量的稀KOH溶液洗涤2-3 次,以除去乙醇；然后用盐酸酸化,加入1/5 乙醚量的FeSO4 或Na2SO3 溶液,振摇,静置,分层后弃去下层水溶液,以除去过氧化物；最后用水洗至中性,用无水CaCl2 或无水Na2SO4 脱水,并进行重蒸馏.