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齐一生物科技（上海）有限公司 第1页
脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书
For Research Use only
仅供研究用
货号：QYS-231059
紫外分光光度法：10 管/9 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A 而生成长链脂肪酸。FAS 普
遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。
测定原理：
FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+；NADPH 在
340nm有吸收峰，而 NADP+没有；通过测定 340nm 光吸收下降速率，计算 FAS 活性。
自备仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 10mL×1 瓶，－20℃保存。用前取出置于 4℃充分解冻后混匀。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 275 μL 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分
装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 275 μL 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分
装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体 10 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 525 μL 试剂四，充分溶解，用不完的试剂分
装后-20℃保存，禁止反复冻融。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组
织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 40min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104
个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建
议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间
隔 7 秒，总时间 3min）；然后 12000g，4℃，离心 40min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
FAS 测定操作：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂四置于 40℃水浴中预热 30 min。
3. 测定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 上清液、20μL 试剂二、20μL 试剂
三、820μL试剂四和 40μL 试剂五，迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值，记录第 30s 和
90s 时吸光值，分别记录为 A1 和 A2。△A 测=A1-A2。Tel: 400-991-0197 Fax: 021-51714517 E-mail:qiyibio@163.com http://www.qiyibio.com
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FAS 活性计算公式：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109
) ÷(Cpr×V 样)÷T
=1608×△A÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol/min/g鲜重) = (△A÷ε÷d×V反总×109
) ÷(W×V样÷V样总)÷T
=1608×△A ÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每 104
个细胞每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反总×109
) ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1608×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化 1nmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×109
) ÷V 样÷T =1608×△A
ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103
/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系
总体积，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V 样：
加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。
