标题凝血酶原时间(PT)测定实验

待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子成为X成为Xa。后者使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为凝血不溶性纤维蛋白，测定凝固所需时间、即为待测血浆凝血酶时间(PT)、PT测定是外源性系统理想和常用的筛选实验，也可作为外源性途径凝血固定做定量试验，同时也可用于口服抗凝剂治疗的监控。标本的来源与保存：

　　静脉采血，置于含有1/10体积0.109mol/L枸橼酸钠抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中，轻轻颠倒混匀。3000rpm(或25O0)离心15分钟，收集上层液(血浆，黄色)，标本在不同条件下保存时间如下：-80℃保存，不宜超过3O天，一20℃保存，不宜超过14天，2一8℃保存，不宜超过6小时，22-24℃保存，不宜超过2小时测定。

　　实验步骤

　　1. 试剂重建：

　　于保存每瓶PT试剂加人2.0ml蒸馏水轻摇溶解。注意：试剂溶解后2-8℃可保存7天，室温(15-25℃)可保存24小时，勿冻结。

　　2. 手工测定：

　　取待测血浆(参比血浆)0.1ml.37℃孵育2分钟，加入37℃预温凝血活酶0.2ml;混匀，立即启动秒表，记录凝固时间，即为PT值。

　　3. 血凝仪测定：

　　请按仪器提供的参数操作

　　正常值：

　　1. 以时间表示11-15秒

　　2. 以PTD表示0.95-1.24

　　3. 以INR表示0.94-1.30

　　注意事项

　　l. 采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管不宜使用普通玻璃管，避免凝血因子活化。

　　2. 采血时止血带不可束缚过紧并不应超过5分钟，否则导致凝血及纤溶因子活化。

　　3. 血液应立即加抗凝剂，血浆制备必须及时，血浆分离应尽快去除血小板血浆分离后应尽快测定。

　　4. 血浆预温不宜超过10分钟。

　　5. 凝血活酶预温不宜超过30分钟。

　　6. 用浊度法测定终点的自动化凝血仪，溶血和较明显的黄疸及脂血会影响测定结果，此时宜用手工法或电子机械或凝血仪测定。

　　7. 红细胞比容超过55%或小于20%时，应调整抗凝剂用量，抗凝剂体积(ml)=0.00185×血液体积(ml)×(100-比容)。

　　8. 不宜使EDTA·Na2. 肝素，草酸盐抗凝，应使用0.109mol/L拘橼酸钠抗凝。

　　9. 一80℃及一20℃保存样品，测定时37℃迅速融化，不可反复冻融。

　　10. 样品采集避免溶血及组织液污染。

　　11. 建议各实验室建立自己的参考值范围。

　　12. 手工操作时，凝血酶原时间的终点计算以出现混浊的初期凝固为准。

　　13. 测定温度36.5-38.5℃过低或过高温度均使PT延长。