标题大鼠ELISA试剂盒选对，用对，才能事半功倍!

大鼠ELISA试剂盒试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠白细胞介素1β（IL-1β）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠白细胞介素1β（IL-1β）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。大鼠ELISA试剂盒选对，用对，才能事半功倍!

一、如何选购
查找待测样本的蛋白浓度：
可以通过NCBI的文献，uniprot，pax-dab上给出的蛋白表达量参考值来比较ELISA试剂盒中给出的样本值与报道值是否一致；试剂盒的应用种属、检测样本的种类：除试剂盒特别说明外，一般不同种属不能通用。常见待测样本种类有：血清和血浆（不同抗凝剂），细胞上清，和细胞裂解液，试剂盒中不同样本的稀释液不混用；

试剂盒的检测范围：
也就是标曲范围，特别要注意待测样本浓度是否落在标曲范围内，对于浓度很高的样本，可以先进行预实验摸索到比较好的稀释倍数后再大量测定样本。 

试剂盒中的稀释线性及回收率：
a.稀释线性一般指样本稀释线性，是将样本梯度稀释下来，看各稀释梯度浓度是否成线性；参考样本稀释线性可以选择样本的zui佳稀释倍数；
b.稀释线性也有做加标稀释线性的情况，加标稀释线性是将标准品加入样本中测定加入的标准品浓度测定是否准确；同样也是确定待测样本稀释倍数的参考指标。一般线性和回收率的范围在80%-120%比较合适； 

试剂盒的其它指标：
a.灵敏度：试剂盒能够检测到的样本zui低浓度的能力，如果待检指标含量很低，需要选择高灵敏度的ELISA试剂盒；
b.板间和板内的变异系数（CV%）:反映板内和不同板之间是否均匀，CV%一般小于10% 比较好。

试剂盒的有效期：
试剂盒的有效期一般是半年至一年，样本准备时间需要考虑到试剂盒的有效期。

二、ELISA如何使用
样本的准备：
尽量使用新鲜样本，不使用有溶血，被细菌污染、标本保存时间过长和标本凝固不全的样本。ELISA检测宜采集新鲜标本，如不能立即测定，5天之内应4℃保存，对于1周后检测的样本应低温冻存；做好分装，长时间冻存的样本避免反复冻融。

待测样本加样：
待检样本过多时，建议分批操作；需要稀释的样本提前做好稀释，注意选对合适稀释液；控制好加样时间，避免加样费时过长造成误差；注意加样角度，垂直加入孔底，不要接触孔壁, 做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。 

温育和洗板：
温育时间和温度一般根据试剂盒的说明书进行选择。温育时可以采用水浴或者湿盒孵育,避免“边缘效应”。
①手工洗板时，拍板时要垂直，避免交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离；
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅。

显色：
市售大鼠ELISA试剂盒中，一般是以四甲基联苯胺(TMB)为底物的显色液，反应条件为37℃或室温反应15～30 min。显色反应需要避光。

读数和数据分析：
终止后读取结果尽量在15min内完成，读取OD值时酶标仪需先预热15～30 min再进行。数据分析一般用四参数和直线拟合法，选择哪种拟合方式，可以依据标曲的相关系数（R2）来确定，R2一般需要大于0.99。