标题细胞培养方式对低温保存后细胞功能影响实验

     用传统低温保存法保存细胞载体复合体, 可能破坏细胞和载体的黏附关系。研究报道, 细胞与细胞及细胞与载体之间的互相接触对维持细胞的存活率至关重要, 细胞生存能力下降的主要原因是由于细胞被分离后无法黏附, 从而引起大量细胞凋亡 , 只有黏附于载体上的细胞才能继续增殖分化以及维持肝细胞正常的代谢功能。因此, 本文将培养于微载体Cytodex与Cytopore的肝细胞进行低温保存, 研究不同培养方式对复苏后细胞与复合体黏附关系的影响, 探讨肝细胞在微载体上的生长及肝细胞的代谢功能, 为研究细胞与微载体复合体的低温保存机理提供有效方法。

    目前, 应用较多的是美国GE公司实体微载体Cytodex与多孔微载体Cytopore等, 这些微载体可以提供足够大的表面积, 使细胞在其表面及内部黏附生长, 并使营养物质进入其空间。近年来, Cytodex与Cytopore系列载体常常应用于细胞的高密度培养, 取得了一些令人满意的结果 , 但载体细胞高密度培养后如何进行复合冻存目前研究较少, 传统研究较多的是细胞冻存。如何低温保存细胞与载体的复合体, 是我们要解决的一个问题。

    肝细胞是贴壁性细胞, 当细胞生长达到一定数量时, 存在细胞接触抑制效应, 阻碍细胞的继续生长 。因此, 体外高密度培养肝细胞需要使用载体材料, 其表面供肝细胞黏附生长, 是后续细胞增殖生长、进而组织化的关键。

     为了研究细胞培养方式对低温保存后细胞功能的影响, 将大鼠肝细胞接种至两种不同微载体(实体微载体Cytodex、多孔微载体Cytopore), 微重力高密度培养后于–80 °C冻存(冻存速率是1 °C/min, 5% DMSO+0.4 mol/L山梨糖醇)。2周后复温细胞与载体材料, 用显微镜观察细胞生长形态, 计算细胞活力情况, 并通过细胞代谢功能指标葡萄糖、白蛋白、尿素等的测定, 反映细胞在两种载体培养和低温保存后的生长和代谢情况。结果表明, 在细胞培养期间, Cytopore的MTT 值、代谢指标值是Cytodex的1~1.5倍, 低温保存后, Cytopore的各项指标与低温保存前差异不显著, 而Cytodex的代谢指标差异显著。因此, 大鼠肝细胞在微载体Cytopore的高密度培养及低温保存比 Cytodex更有利于细胞的生长和代谢。