标题培养基制造和灭菌的办法以及步骤

微生物培育基是供微生物成长、繁衍、代谢的混合养料。因为微生物具有不同的养分类型，对养分物质的要求也各不相同，加之研究的意图不同，所以培育基的种类许多，运用的质料也各有差异，但从养分视点剖析，微生物培育基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、成长素以及水分等。别的，培育基还应具有适合的 pH 值、必定的缓冲才能、必定的氧化还原电位及适宜的渗透压。为了到达特定要求的研究，需求进行培育基制造和灭菌，那么微生物培育基该怎么制造与灭菌呢?

1. 调理 pH 值
用 pH 试纸 (或 pH 电位计、氢离子浓度比色计) 测验培育基的 pH 值, 如不契合需求, 可用 10%HCl 或 10%NaOH 进行调理, 直到调理到配方要求的 pH 值停止。

2. 分装
已过滤的培育基应进行分装. 如果要制造斜面培育基, 须将培育基分装于试管中. 如果要制造平板培育基或液体、半固体培育基, 则须将培育基分装于锥形瓶内。

3. 过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培育基过滤. 用纱布过滤时, zui好折叠成六层, 用滤纸过滤时, 可将滤纸折叠成瓦棱形, 铺在漏斗上过滤。

4. 制造溶液
向容器内参加所需水量的一部分, 按照培育基的配方, 称取各种质料, 顺次参加使其溶解, zui终补足所需水分，对蛋白胨、肉膏等物质, 需加热溶解, 加热进程所蒸腾的水分, 应在悉数质料溶解后加水补足。
制造固体培育基时, 先将上述已配好的液体培育基煮沸, 再将称好的琼脂参加, 持续加热至彻底消融. 并不断搅拌, 防止琼脂糊底烧焦。
分装时, 一手捏松绷簧夹, 使培育基流出, 另一只手抓住几支试管或锥形瓶, 顺次接取培育基。分装时, 注意不要使培育基粘附管口或瓶口, 防止浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培育基量, 视试管和锥形瓶的巨细及需求而定. 一般制造斜面培育基时, 每只 15×150 毫米的试管, 约装 3～4 毫升 (1/4～1/3 试管高度), 如制造深层培育基, 每只 20×220 毫米的试管约装 12～15 毫升。每只锥形瓶装入的培育基, 一般以其容积的一半为宜。

5. 制造斜面培育基和平板培育基
培育基灭菌后, 如制造斜面培育基和平板培育基, 须趁培育基未凝结时进行。
(1) 制造斜面培育基。在试验台上放 1 支长 0.5～1 米左右的木条, 厚度为 1 厘米左右，将试管头部枕在木条上, 使管内培育基天然歪斜, 凝结后即成斜面培育基。
(2) 制造平板培育基。将刚刚灭过菌的盛有培育基的锥形瓶和培育皿放在试验台上, 点燃酒精灯, 右手托起锥形瓶瓶底, 左手拔下棉塞, 将瓶口在酒精灯上稍加灼烧, 左手翻开培育皿盖, 右手敏捷将培育基倒入培育皿中, 每皿约倒入 10 毫升, 以铺满皿底为度. 铺放培育基后放置 15 分钟左右, 待培育基凝结后, 再 5 个培育皿一叠, 倒置过来, 平放在恒温箱里,24 小时后查看, 如培育基末长杂菌，即可用来培育微生物。

6. 加棉塞
分装结束后, 需求用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的首要意图是过滤空气, 防止污染. 棉塞应选用普通新鲜、干燥的棉花制造, 不要用脱脂棉, 防止因脱脂棉吸水使棉塞无法运用。制造棉塞时, 要根据棉塞巨细将棉花铺展成恰当厚度, 揪取手掌心巨细一块, 铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中, 用右手食指插入棉花中部, 一起左手食指与姆指稍稍紧握, 就会形成 1 个长棒形的棉塞. 棉塞作成后, 应敏捷塞入管口或瓶口中, 棉塞应紧贴内壁不留缝隙, 以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松, 塞好后, 以手提棉塞、管、瓶不下落为适宜。棉塞的 2/3 应在管内或瓶内, 上端露出少量棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札, 准备灭菌。