标题论远慕生物感受态的制备及注意事项

   感受态是指一种容易接受外源DNA的状态。在转基因的过程中，一般会把待转化的宿主细胞处理成为感受态，以提高转化的效率。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。

DH5a菌感受态的制备：

1、从LB平板上挑取DH5a单菌落,接种于3LB液体培养基中 37℃下振荡培养12h左右直至对数生长后期培养基中。

2、将菌悬液以1:100的比例接种于LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜，再将菌悬液以1:100的比例接种于100ml LB液体培养基中37℃，210rpm至OD ＝0.5左右(生长对数期），约2-3h。

3、将菌液转移到两只预冷的50ml无菌离心管中，冰浴30min，4℃、5000rpm离心5min，弃上清。

4、每只离心管中加入4ml冰冷的0.1M CaCl2，使菌体重悬，冰浴30min，4℃、5000rpm离心5min，弃上清。

5、每只离心管中加入1ml冰冷的0.1M CaCl2，重悬后分装到无菌的1.5ml离心管中(每管100µl)。

6、置-40℃冰箱长期保存。

制备感受态的注意事项：

1、所有器具必须清洁干净，避免污染。

2、培养基装量建议不要高于培养基体积/三角瓶容量=100ml/500ml，50ml/250ml，厌氧生长出来的菌体是做不出效率高的感受态的。 

3、接种前的pH值在6.8-7.2。等菌摇好后，可以测一下pH值，不要低于6.0，最好在6.5以上。

4、经验证明，当培养基中存在一定量的Mg2+离子时，该方法制得的感受态要相对较高。在制备普通感受时，使用20mM MgCl2做为培养基的添加物，在感受态收获之前20-30分钟加入，会收到很好的效果。

5、较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了Inoue的高效感受态制备方法。

6、在保存感受态时，DMSO要比甘油的效果要好，它会使感受态的效率增加。

7、液氮速冻也会使感受态的效率提高，因此推荐用液氮速冻感受态，然后保存于超低温冰箱内。

8、冻存的感受态用一次拿一管，不要反复冻融。化冻之后立即使用，不要冰上放太久。

9、操作时可以轻弹轻甩，尽量避免用移液器吹吸。