标题新型离心技术(二)

2．快速纯忆质粒DNA(脱氧核糖核酸)

离心色层吸附柱(Horaprep p-DNA)设备是用来纯化和恢复在细菌染色体中的双链质粒DNA的。这个离心柱的方法令人注目地代替了使用溴乙锭一氯化铯的密度梯度的纯化法，并且宣告了不再需要超速离心而可实现全部离心操作过程：收集细菌、制备澄清的溶菌液、制备粗的质粒DNA和最终纯化质粒。

用离心色层柱Heraprep p-DNA制备的质粒ONA有着可与溴乙锭一氯化铯密度梯度纯化的质粒相媲美的纯度。广泛地检测了用离心色层柱Heraprep p-DNA纯化的质粒DNA，证明其纯度适用于限制性内切酶分析、连接、转染哺乳动物细胞和转化细菌。此外，大小由2．7kb到至少23kb的质粒DNA都可以用Heraprep

p DNA柱来纯化。

Heraprep P—DNA离心色层柱还包括1个处理管和1个收集管。一旦制备好粗的质粒DNA，并且将它悬浮于1．8ml的10ml TrisHCL，pH值为8．0，lmM EDTA，IM NaCI溶液中时，样品就可以在Heraprep P—DNA柱中离心了。

在启用这根柱时，除去其顶部与底部的封口，排去过量的平衡缓冲液。然后将柱放在1根收集管中．装入16ml的套简，在HSA7．290不平转头中， 1 100×g离心lmin，这根柱就作好使用准备了

收集到的流出液和收集管一起丢掉。树脂在上部的柱支撑物之下压缩了大约lcm是正常的。

样品的体积是1．8ml。样品必须十分小心地加到树脂床的支撑物上面去。

柱和收集管这一套装置在2O℃下，以2 430r／min(1 100Xg)的速度离心25min

向含有纯化质粒的流出液中加入0．6体积的异丙醇，颠饲一下加以混合，室温下20min。

在2O℃ 下，用HFA 固定角转头22．5O，以l 000r／min(1 200×g)的速度离心30min回收质粒DNA。用冷的70 乙醇洗质粒DNA1次，真空抽干并悬浮于适当的缓冲液中。

虽然，高速转头的种类还可以由一些特殊型式来进一步扩充，例如连续流量式和洗涤式转头等，但是，现有的转头及其附件已经能够应付所有的离心任务了，并且典型地属于超速离心任务 试样的容器和常用的以及商业上通用的容器是一样的