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兔不均一核糖核蛋白U (HNRPU) ELISA 试剂盒
实验原理
1. 抗体或抗原的吸附:将待测抗原或抗体吸附到固相载体上,常用的载体有微孔板、玻璃纤维、聚苯乙烯等。这些载体表面具有特殊的化学基团,能够与待测抗原或抗体特异性结合。
2. 酶标记的抗体或抗原的结合:将酶标记的抗体或抗原与待测抗原或抗体结合,形成酶标记的抗原-抗体复合物。酶标记的抗体或抗原具有高度的特异性和亲和力,能够与待测抗原或抗体形成稳定的复合物。
3. 底物显色反应:当酶标记的抗原-抗体复合物与底物溶液接触时,酶能够催化底物分解,产生颜色变化。通过测量颜色的变化程度,可以判断待测抗原或抗体的浓度。
实验所需自备物品
1. 酶标仪(450nm)
2. 加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
试剂盒组成
名称 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 12 孔×8 条 | 12 孔×4 条 | 无 |
标准品 | 0.5mL | 0.5mL | 按说明书进行稀释 |
标准品稀释液 | 6mL | 3mL | 按说明书进行稀释 |
样本稀释液 | 6mL | 3mL | 按说明书进行稀释 |
检测抗体-HRP | 6mL | 3mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 20mL | 20mL | 按说明书进行稀释 |
底物 A | 6mL | 3mL | 无 |
底物 B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2 张 | 2 张 | 无 |
说明书 | 1 份 | 1 份 | 无 |
自封袋 | 1 个 | 1 个 | 无 |
操作步骤
1. 准备工作:将试剂盒从冰箱中取出,室温放置30分钟,使试剂盒恢复至室温。同时准备好实验所需的材料和器具。
2. 加样:在酶标板的弟1个孔中加入标准品50μL,然后在后续的孔中依次加入待测样本50μL。
3. 温育:将酶标板密封,在37℃下温育30分钟。
4. 洗涤:用洗涤液清洗酶标板,共洗涤5次。每次洗涤后,用吸水纸轻轻吸干孔内液体。
5. 加酶:在每个孔中加入酶标物100μL。
6. 温育:再次将酶标板密封,在37℃下温育30分钟。
7. 洗涤:用洗涤液清洗酶标板,共洗涤5次。每次洗涤后,用吸水纸轻轻吸干孔内液体。
8. 加底物:在每个孔中加入底物A液50μL,再加入底物B液50μL。
9. 终止反应:在每个孔中加入终止液50μL。
10. 检测:用酶标仪在450nm波长下读取各孔的吸光度(OD值)。
兔不均一核糖核蛋白U (HNRPU) ELISA 试剂盒
结果分析
根据标准品和样本的OD值,绘制标准曲线,从而计算出样本中角蛋白1(KRT1)的浓度。具体分析方法可参考试剂盒说明书或相关文献。
注意事项
注意事项:
A 仔细阅读说明书。
B 检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期,请勿使用。
C 按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)。
D 标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。
E 准备好所有实验额外所需物品,(比如移液器,试管,清洗器,酶标仪)。
F 按说明书将所用试剂平衡至室温,根据检测标本数量确定所需试剂的量。
G 检查试剂盒内每种试剂的贮存条件,所有试剂均按照试剂盒内说明书推荐的条件存储。
H 检查不稳定或者变质的试剂溶液(比如沉淀或变色)。有些试剂,比如标准品稀释液或者检测稀释液,可能在设计时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之,必需充分混匀。而由于沉淀物的特性,在加入酶标板之,必需不停搅拌。
I 充分的孵育时间和温度。
J 切勿使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。
K 在混合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫产生。
L 在实验开始之,安排好实验流程。
M 在实验开始之,清洁工作台。
N 若有问题,应与我公司或代理商的技术支持联系
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