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阴离子去垢剂SDS
SDS(十二烷基硫酸钠)是阴离子去垢剂,本身带负电荷的SDS能够与蛋白质的疏水区相结合,使蛋白质伸展和解聚,并使蛋白质呈一致的强负电荷,从而消除了不同蛋白质分子之间的电荷差异。在收集细胞蛋白的操作中,它主要作用有二:1、能改变细胞的表面张力而使细胞膜破裂,效果很强很迅速;2、可以使蛋白质变性而使其与DNA分离,在收蛋白最后一步操作中离心下来的就是基因组DNA,上清液中即使有点RNA也会很快降解。在1XSDS蛋白裂解液中,SDS的终浓度为2%,即每50ml裂解液中含有1gSDS。 SDS的应用广泛,蛋白质收集、Western Blot里上样乃至SDS-PAGE凝胶电泳过程中都会应用到。然而SDS是离子型去垢剂会导致蛋白质变性,所以对于要检测蛋白质间相互作用的免疫沉淀(IP)之类的实验就不能使用了。
SDS是离子型表面活性剂。
它主要功能有:
(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)SDS能与蛋 白质结合成为R-O-SO3…R┿-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除 干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰
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