标题大鼠γ分泌酶(γ-Secretase)ELISA试剂盒

大鼠γ分泌酶(γ-Secretase)ELISA试剂盒

概述:

ELISA（酶联免疫吸附检测）是一种平板检测技术，旨在检测和定量肽、蛋白质、抗体和激素等物质。其他名称，比如酶 免疫测定（EIA）也用于描述该的技术。在 ELISA 中，抗原必须固定化到固体表面，然后与连接到酶的抗体混合。通过 与适当的底物孵育，测量报告基因酶的活性来产生可测量的产物，从而实现检测。该检测策略中的关键元素是高度特 异性的抗体-抗原相互作用。

ELISA试剂盒的特点有：

一、高效、灵敏、特异的抗体

二、节省实验经费

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型

五、稳定的重复性和可靠性

ELISA 试剂盒主要保证规格概述

检测内精度

检测内验证显示检测板内孔间的重现性。检测内验证产生的数据有助于确保在板的不同孔中检测的样品给出可比较结果。以下是为具有代表性的板内验证实验生成和报告的数据示例。在本示例中， 通过在同一检测中检测三个样品各重复 14 次来评估 Invitrogen VCAM-1 人 ELISA 试剂盒。每个样品的 %CV 表明该检测具有良好的重现性。具有已知 Hu sVCAM-1 浓度的样品重复检测14 次，以确定检测的精度。

检测间精度

检测间精度显示不同日期进行的检测间重现性。检测间精度通常为< 10%。这确保获得的结果随着时间的推移和试剂盒之间保持一致。以下是为检测间精度生成和报告的典型数据示例。在该示例中， 使用 Invitrogen 淀粉样蛋白 β 42 人 ELISA 试剂盒在多天内检测三份样品，共检测 36 次。结果显示变异系数小于 10%，从而证明了检测间良好再现性。

稀释线性度

线性是相对于基于标准曲线的分析物计算量来定义。样品中分析物的终计算浓度应与检测定量范围内的任何稀释浓度相同。开发完善的免疫检测试剂盒可大限度地减少不同样品基质和其他可能干扰的因素的潜在影响。稀释线性验证实验提供了关于在不同稀释水平下测试的样品结果精度的信息。对每种经验证样品类型进行稀释线性测试，如果结果是每种稀释预期浓度的 70%-130%，则视为良好。线性对于在测定的动态范围内准确测量分析物浓度非常重要，可使用公式计算：

% 线性度 = (稀释后测量浓度 / 预期浓度) x 100

特定样品类型的稀释线性度通常如下表所示。在该示例中， 使用 HeLa 细胞裂解物评价 Invitrogen c-Myc (总) 人 ELISA 试剂盒。在检测的动态范围内，用试剂盒随附的标准稀释缓冲液稀释 HeLa 细胞裂解物。测量值与预期值显示出良好的检测线性，并且没有来自样品基质的明显干扰。

HeLa 细胞在 37°C 下，含有 10% 胎牛血清 (FBS) 的 DMEM 中生长，并用 细胞提取缓冲液裂解，并进行超声处理。将该裂解物在标准稀释缓冲液中稀释至检测范围，并测量 c-Myc（总量）。检测结果与预期浓度的线性回归检测产生的相关系数为0.99。

ELISA 平行性

平行性提供了在给定 ELISA 中以相同方式检测天然和重组样品的确认。平行性验证产生的数据确保给定分析物在天然样品中以类似于标准曲线的剂量依赖性方式被识别。 

图 1 显示了 ELISA 试剂盒验证期间针对并行性生成的数据。在检测的动态范围内连续稀释重组标准品、大鼠血清和大鼠血浆，并使用我们的大鼠生长激素 ELISA 试剂盒结果表明，稀释缓冲液中的标准品可用于准确定量测试基质中的样品浓度。

图 1.大鼠生长激素 ELISA 平行性
随机大鼠血清和血浆样品在标准稀释缓冲液中连续稀释。将每种稀释液的光密度与大鼠生长激素标准曲线作图。该标准品准确反映了天然样品中大鼠生长激素的含量。

ELISA 回收率

回收率用于确定分析物检测是否受样品基质差异的影响。基质（如血清和血浆）可能具有干扰因素，影响 ELISA 准确定量分析物的能力。

通过将已知量的分析物加标到不同样品基质中来验证回收率。进行检测并确定回收率。通常，如果平均回收率为 80%-120%，则认为样品基质对检测准确定量分析物的能力影响小。 

右表是用于报告回收率的典型格式。在该示例中，   检测了 Invitrogen 脂联素人 ELISA 试剂盒在 5 份不同血浆样品中的回收率。 

ELISA 灵敏度

灵敏度定义为可与背景区分的低分析物水平。这通常称为分析灵敏度或检测限。通过将零标准重复获得的平均 O.D. 加上 2 个标准偏差来确定灵敏度。

例如， Invitrogen Tau (磷酸化) [pT181] 人 ELISA KI 灵敏度 <为 10 pg/mL。这表明测试的每个试剂盒批次的灵敏度均低于 10pg/mL。用于报告 ELISA 测定灵敏度的典型规格是 " 人 Tau [pT181] <的低检测浓度为 10 pg/mL。这通过零标准检测 64 次时获得的平均 O.D. 加上两个标准偏差来确定。

ELISA 特异性

进行特异性测试以验证检测到的目标分析物与其他密切相关的分子未发生交叉反应。交叉反应可能导致假阳性结果或不准确定量。为了确保仅识别所需的分析物，对一组其他物质进行交叉反应性测试。

例如， 通过筛选 20 种不同物质的交叉反应性，对 Invitrogen IL-6 小鼠 ELISA 试剂盒的特异性进行了检测。用于报告 ELISA 特异性结果的典型格式是 " 使用 IL-6 小鼠 ELISA 试剂盒检测了一组 10 ， 000 pg/mL 的物质的缓冲溶液。 1β γ 检测后发现无交叉反应性：小鼠 IL-1 β ， IL-2 ， IL-4 ， IL-10 ， IFN- β ， TNF- α ；大鼠 1β IL-1 β ， IL-2 ， IL-4 ， IL-6 ， IFN- γ ， TNF- α ；人 IL-2 ， IL-4 ， IL-6 ， IL-10 ， IL-12 ， IFN- γ ， TNF- α ；猪 IL-8

ELISA 质量控制

ELISA 的生产过程涉及高质量生产标准，以确保高质量 ELISA 试剂盒的一致生产。基本因素包括—严格的文档和记录保存，人员培训，质量控制程序，设施和设备维护，关键流程的验证，原材料控制，可追溯性，环境监测，变更控制， 和符合监管标准。 

ELISA 移液和洗涤技术技巧

移液技巧

1. 使用符合制造商建议范围内的正确移液器

2. 确认吸头已牢固地插与移液器上

3. 确认移液时没有气泡

4. 在每个标准品，样品或试剂之间更换吸头

5. 每种试剂使用不同的储液槽

6. 将样品吸取到孔的侧面，避免飞溅

7. 始终进行样品 / 标准品复孔设置

洗涤流程

1. 通过将吸头轻轻地降低到每个孔底部，完全吸液所有孔中的液体。
    备注：小心操作，不要划伤孔内侧。

2. 用至少 400 μ L µL 的洗涤缓冲液填充孔

3. 浸泡 15 到 30

4. 从孔中吸出洗涤缓冲液

5. 按照提示重复方案 (通常 3-4 次)

6. 清洗完成后，翻转孔板并在吸水组织上轻敲 (必要时用力) 干燥。确保清除所有残留的液体。

7. 或者，也可使用洗瓶或自动洗板机。请务必 遵循上述内容。

实验步骤

1. 使用将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。

2. 标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成不同的梯度， 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果，每次实验请使用新的标准品溶液。

3. 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。

注意事项剂盒的储存

1. 未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。

2. 使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。

须知：

试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

公司与各大高校、医院及权威科研单位保持着良好的合作关系，公司的产品质量及服务态度得到了他们的一致认可。笃玛生物本着客户至上的原则为客户提供优质产品，公司产品有任何质量的问题免费包退换（非人为因素造成的）。公司提供免费代测服务，并且收到样本七个工作日出结果，确保数据的准确性

​