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实时荧光定量PCR 简介 荧光定量PCR全攻略 | |||
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荧光定量PCR检测技术从诞生到现在已经有 8 年了,但是其应用在近四年才迅猛增长。在 Medline 数据庫中,用“ Taqman” 或 ”real time PCR” 作为关键词检索,在1996 年仅有 19 篇,在 1997 年仅有 28 篇,在 98 、 99 、2000 年分别达到了 52 、 157 、 409 篇, 2003 年已经达到2984 篇,相信在不久的将来会有更多的文章发表。针对实时 PCR 这一热点领域,闪晶公司对它进行了深入细致的研究,并且及时地为广大科研人员推出这项技术服务。
• Taqman 技术:该技术以美国 ABI 公司为代表。 PCR 扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸,两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收, PCR 仪检测不到荧光信号; PCR 扩增时(在延伸阶段), Taq 酶的 5'' - 3'' 外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条 DNA 链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步,这也是定量的基础所在。
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ABI公司
Taqman探针的合成标记
Sybr green I荧光染料
荧光定量PCR Taq酶
热启动荧光PCR定量核心试剂盒
荧光定量PCR一步法RT-PCR试剂盒
TrizolRNA提取试剂
UNG酶
dUTP
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