标题肉与肉制品 胆固醇含量测定

中华人民共和国国家标准

肉与肉制品 胆固醇含量测定

Meatmeat products-Method for determination of cholesterol

 1 主题内容与适用范围

本标准规定了肉与肉制品中胆固醇含量的测定方法。

本标准适用于肉与肉制品中胆固醇含量的测定。

2 引用标准

GB 9695.1 肉与肉制品 游离脂肪含量的测定

3 原理

肉与肉制品中的脂类经皂化后,胆固醇作为不皂化物被提取出来,并与一定量的内标物

混合后一起注入气相色谱柱,求出胆固醇与内标物的峰面积比,根据工作曲线计算胆固醇的

重量,以求得肉与肉制品中胆固醇含量。

4 试剂

所用水均为蒸馏水或相当纯度的水。

4.1 无水乙醚。

4.2 氯仿(GB 682)。

4.3 1 mol/L氢氧化钾(GB 2306)/乙醇(GB 678)溶液。

4.4 无水硫酸钠。

4.5 胆固醇:1.0mg/mL氯仿溶液。

4.6 内标溶液:

4.6.1 5-α胆甾烷/氯仿标准溶液:1.0mg/mL。

4.6.2 菜油醇/氯仿标准溶液:3.0mg/mL。

4.6.3 胆固醇与5-α胆甾烷混合液:上述两种标准液等体积混合。

5 仪器和设备

5.1 实验室常规仪器。

5.2 气相色谱仪,配有FID检测器。

6 试样

按照GB 9695.1得到的脂肪。

7 分析步骤

7.1 不皂化物的提取

称取1.00g脂肪,置于10mL容量瓶中用氯仿定容并摇匀。准确量取该试液1～5mL、置于25mL具塞试管中,准确加入0.5～1mL内标物溶液(4.6.1),然后将氯仿蒸干。加入1mol/L氢氧化钾溶液5mL,装上冷凝管,在85～95℃水浴上缓缓皂化1h。取下冷却至室温，全部移入50mL分液漏斗中,用水10mL洗具塞试管,洗液并入分液漏斗,加乙醚10mL轻轻振摇,静置分层后,将水相放入原试管中,加乙醚10mL振摇,待分层后,将乙醚移入分液漏斗内。再用10mL乙醚提取一次,此时分液漏斗中共有30mL溶液。用水2～3mL洗涤乙醚液,分层后,弃去水相,用无水硫酸钠10g干燥后,将乙醚层移入另一具塞试管中,通氮气吹干后,加入乙醇1mL。

7.2 色谱条件

7.2.1 色谱分离条件选择:对胆固醇峰要求其理论塔板数不少于1 600;胆固醇与菜油醇二

者峰分辨率不小于2.2;胆固醇的保留时间在8～12min之间;胆固醇峰强度为满量程的0.25～0.5。

7.2.2 2％OV-1/chromosorb W(60～80目)φ3mm×2m。

7.2.3 柱温:260℃。

7.2.4 进样口及检测器温度:300℃。

7.2.5 载气(高纯氮)流速:60mL/min。

7.3 工作曲线制作

7.3.1 不同配比的胆固醇与5-α胆甾烷混合标准液:

以表中所列举的不同组合的胆固醇标准液和5-α胆甾烷混合样品置于具塞试管中,将溶剂通氮气吹干后,加入1 mL乙醇,取1～3μL注入色谱柱中。

从所得到气相色谱图求出胆固醇和5-α胆甾烷各峰的面积比，以峰面积比为纵坐标，质量比为横坐标，制作工作曲线，此线斜率的倒数为K值。

7.3.2 试样的气相色谱分析。

8 分析结果的计算

式中:X——样品中胆固醇含量,mg/100g;

A1——胆固醇的峰面积;

A2——5-a胆甾烷的峰面积;

k——由工作曲线求得的胆固醇和5-a胆甾烷的质量比与峰面积比的比值;

Wt——脂类试样中添加的内标物的质量,mg;

fat％——样品中脂肪的含量；

W——脂肪质量,g 。

当符合允许差的要求时,取两次测定的算术平均值作为结果,精确至0.1mg/100g。

9 允许差

同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过平均值的10％。

附加说明:

本标准由中华人民共和国商业部提出。

本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。

本标准由中国肉类食品综合研究中心负责起草。

本标准主要起草人鲁红军、刘小东、蒲健