科研服务

1. 基因克隆服务：

   基因克隆是指从样本组织或细胞中抽提总RNA，反转录，设计合成特异性引物后，通过RT-PCR扩增获得目的基因的DNA序列，获得编码全长蛋白质序列的DNA序列。根据特定序列设计特异性引物，通过PCR方法从组织或细胞中调取目的基因、克隆到 T 载体并进行测序。服务范围包含TA克隆构建、定向克隆构建、基因3’RACE克隆、基因5’RACE克隆等基因克隆服务。

2. 荧光定量PCR服务：

   荧光定量PCR是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理是随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光染料法和荧光探针法。荧光染料SYBR Green嵌入到双链DNA分子后构象发生变化，能够吸收497nm的激发光并发出520nm的荧光；而不掺入DNA双链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。TaqMan 荧光探针是在扩增时加入一个特异性的寡核苷酸荧光探针，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq 酶的 5＇-3＇ 外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。服务内容包括：核酸定量分析、基因表达差异分析、甲基化检测、SNP检测、肿瘤基因检测、药物疗效考核、产前诊断和病原体检测等相关检测分析。

3. SNP检测服务

人类基因多态性既来源于基因组中重复序列拷贝数的不同，也来源于单拷贝序列的变异。其中单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs），目前倍受关注的一类多态性主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中*常见的一种。占所有已知多态性的90%以上。我们将会按客户要求灵活定制SNPs分型方案，提供多种技术平台，满足不同规模项目的需求。技术平台主要有：①测序分型：SNP分析的金标准，可发现未知SNP位点；但成本较高，工作量大周期长，不适合大样本做疾病关联分析。②PCR-RFLP分型：判断依据酶切后产生片段的大小和数目的变化，技术简便，价格便宜，仅使用已知SNP判断，事宜少量样本；但费时费力，灵敏度差，容易造成人工假相，使结果出现偏差。③Taqman 探针分型：适合已知SNP位点、位点数量少、通量高的检测，结果直观清晰，实验闭管进行，因而减少了PCR污染的风险；但探针合成费用高，不能发现未知SNP位点。④飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）分型：检测速度快，理论上能分析单个碱基的变化；但纯物理加成易受到样本因素的多种干扰，精确度难以保证。⑤全基因组分型芯片：起始样品量要求很低，还能够检测多个感兴趣的区域，从

而检出罕见的基因突变；价格昂贵。

4. DNA甲基化检测服务

DNA甲基化是*早发现的基因表观修饰方式，真核生物中的甲基化往往仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5＇-端的胞嘧啶转变为5＇-甲基胞嘧啶。通常情况下，DNA甲基化能够抑制基因的表达，而去甲基化则会诱导基因的重新活化和表达。通过这种DNA修饰方式可以在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控。人DNA的甲基化状态与生长发育调控密切相关，比如抑癌基因通过增加CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度，而CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态，这样将导致抑癌基因表达的下降，引起肿瘤的发生。甲基化检测的研究应用：1. 寻找甲基化位点；2. 验证甲基化位点，并进行甲基化程度分析；3. 分析甲基化位点与研究的相关性；4.启动子甲基化检测来验证基因的表达量变化。

5. cDNA文库构建服务

SMART技术的出现是一个新的里程碑，这个称作 Switching Mechanism At 5 end of the RNA Transcript(SMART)，能使我们扩增得到的cDNA就是全长cDNA；同时结合本公司文库均一化技术和消减文库技术，特提供例如：普通cDNA文库、SMART cDNA文库、均一化（Normalized） cDNA文库、SMART 均一化cDNA文库、SMART cDNA消减文库等基因文库构建服务。SMART cDNA文库特点：1. 只需要少至25ng的mRNA或50ng的总RNA；
2. 采用Clontech SMART技术，全长比率高；3. 实验周期短，*快2～3周即可完成整个文库构建。SMART cDNA文库应用：1．物种种质资源开发与保护；2．物种遗传功能分析；3．基因克隆与表达；4．新基因发现；5．功能基因的筛选。

6. SSH文库构建服务

   抑制性消减杂交文库技术是一种集抑制消减杂交、基因文库和斑点杂交等技术为一体的、突破性的差异表达基因高效筛选技术，与传统的DD-PCR、SAGE及cDNA－RDA等技术相比，具有低丰度mRNA富集效率高、假阳性低、灵敏度高、重复性好等特点。本服务方法结合了抑制性PCR和消减杂交技术，同时融入我公司自主创新研发的基因文库技术，经过体系不断优化，建立起了一套快捷、有效的差异基因全长cDNA筛选的方法。技术特点：只需要0.5-2 μg的 poly A RNA 或只需50 ng总RNA 可以在物种遗传信息未知情况下进行多样本差异基因高通量筛选，尤其适用于非模式生物（植物\昆虫\鱼类等）研究 
通量差异基因以克隆形式获得保存，方便后续实验研究（测序、RACE、引物设计等）。应用领域：动、植物发育和分化研究；动、植物抗药性基因差异；组织（病理和正常）基因差异；疾病易感性差异研究；微生物基因分型研究。

7. 噬菌体表面展示服务

   噬菌体展示技术主要原理以改构的噬菌体为载体，把待选基因片段定向插入噬菌体外壳蛋白质基因区，使外源多肽或蛋白质表达并展示于噬菌体表面，进而通过亲和富集法表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。该技术作为筛选与多种靶分子 ( 如核酸、抗体、酶类、细胞表面受体等 ) 具有特异性亲和力或活性的肽的一个有效方法，自问世以来已取得了很大的发展， 并被广泛地应用于基因治疗、基因疫苗研究、抗原表位研究、药物筛选与设计、研究细胞信号传导等领域。技术优势：①形成的融合蛋白表达在噬菌体颗粒的表面，不影响和干扰噬菌体的生活周期，同时保持的外源基因天然构象，能被相应的抗体或受体所识别。② 外源多肽或蛋白质表达在噬菌体的表面，而其编码基因作为病毒基因组中的一部分可通过噬菌体的单链DNA测序推导出来，该技术实现了基因型和表型的转换。③与酵母双杂交和杂交瘤细胞技术相比，噬菌体展示系统在筛选蛋白质间相互作用和分泌抗体时更为简便、高通量，更适合于不能用酵母双杂交研究的膜蛋白和转录因子，并且无需了解被研究的蛋白质的结构，,在筛选过程中通过适当改变条件可以直接评价相互结合的特异性。应用领域：DNA、RNA 结合蛋白的研究；蛋白-蛋白相互作用的研究；非蛋白分子与蛋白相互作用研究；胞与蛋白相互作用的研究；用于模拟表位的研究；药物筛选与导向；抗体疫苗制备。服务项目：1. 酵母展示文库构建；2. 噬菌体展示文库构建；3. 大肠杆菌展示文库构建；4. 展示文库淘选服务。

8. 酵母双杂服务

   酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。同以往研究蛋白质—蛋白质之间相互作用的实验手段相比，双杂交系统具有其独特优势。首先，融合体蛋白之间的相互作用是在真核酵母细胞内进行，蛋白质有可能保持天然的折叠状态，类似其在体内生理状态下的情况，这是其他离体生化检验方法所缺乏的，因此较之后者，它所证实的蛋白质间相互作用将更接近于在体的真实水平。其次，双杂交系统的敏感度即高，可以检测到在蛋白质之间结合常数低至 1mmol/L 左右的微弱作用。许多微弱或短暂的蛋白质之间的相互作用可以借助报道基因表达过程中的多级放大效应反映出来；融合蛋白基因在强启动子的作用下，处于较高的表达水平。第三，在筛选 cDNA 文库时，双杂交系统能够简捷地得到编码相互作用蛋白的基因序列，它只需构建质粒而不必准备抗体或纯化蛋白，省略了其它体外检测蛋白之间相互作用方法所必须的蛋白抽提、纯化等繁琐步骤。酵母双杂交系统的应用：1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用；2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点；3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白；4、寻找具有药物治疗作用的小分子多肽；5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物；6、绘制蛋白质相互作用图谱。

原创作者：铼博（上海）生化科技有限公司