【摘要】  目的:研究芹菜素对慢性间歇低氧幼鼠认知损害的保护作用。方法:八臂迷宫训练成功的3～4周龄雄性SD幼鼠40只，随机分空气对照组(C组)、间歇低氧组(H组)、间歇低氧二甲基亚砜组(R组)、间歇低氧芹菜素+二甲基亚砜组(Q组)。间歇低氧2周后八臂迷宫测试全部幼鼠学习记忆能力。以透射电镜观察海马CA1区神经元的超微结构变化。结果:与R组比，Q组参考记忆错误(RME)和总记忆错误(TE)显著降低(P＜0.05，P＜0.01)。与C组比，H组RME、工作记忆错误(WME)和TE显著增高(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01)。电镜下H组和R组海马CA1区神经细胞的形态、胞浆内的细胞器与正常细胞比较有明显变化，Q组和C组无明显变化。结论:芹菜素对于慢性间歇低氧幼鼠海马神经元具有保护作用，从而减轻慢性间歇低氧对幼鼠空间学习记忆能力的损伤。

【关键词】  慢性间歇低氧 芹菜素 记忆 海马 超微结构

    Abstract:  Objective: To explore the protective effect of apigenin in immature rats treated with chronic intermittent hypoxia. Methods: Forty 3～4 week-old SD rats which have been trained to complete the 8-Arm (4-arm baited) radial maze were randomly divided into air control(C) group, intermittent hypoxia(H) group, DMSO control(R) group ａnd apigenin + DMSO(Q) group. After 2 weeks intermittent hypoxia, these immature rats were tested by 8-Arm (4-arm baited) radial maze to measure spatial memory ａnd the ultrastructure of hippocampal CAl neurons was studied under electron microscope. Results: Compared with R group, Q group had significantly less in reference memory error ａnd total memory error (P＜0.05, P＜0.01).Compared with C group, H group had significantly reference，working ａnd total memory error, respectively（P＜0.01, P＜0.05, P＜0.01).The nuclear membrane of hippocampal CAl neurons in H group ａnd R group were distorted compared with normal cells; Q group ａnd C group had no changes. Conclusion: Apigenin protects hippocampal neuron in immature rats, ａnd improves spatial learning ａnd memory damaged by chronic intermittent hypoxia.

    Key words:  chronic intermittent hypoxia; apigenin; memory; hippocampus; ultrastructure

    芹菜素是存在的一种黄酮类化合物，有研究显示芹菜素对氧自由基、NO自由基等均有作用，可抑制导致细胞死亡的氧化作用,从而体现了神经保护的作用[1]。但其应用于防治阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAHS)儿童认知损害方面的报道较少。本试验模拟OSAHS的病理生理基础，建立慢性间歇低氧的幼鼠模型，并用芹菜素进行干预，采用八臂迷宫测试其学习记忆能力，以透射电镜观察海马的神经细胞超微结构，观察芹菜素干预慢性间歇低氧幼鼠认知损害的效果并探讨可能的作用机制。

    1  材料和方法

    1.1  动物与药品  取体重为80～100 g健康雄性SPFSD幼鼠(3～4周龄)50只，由温州医学院实验动物中心提供，合格证号：SYXK(浙)2005-0061。芹菜素纯度98%，批号：060313（购自陕西慧科植物开发有限公司）；二甲基亚砜批号：040602（购自上海生工生物工程技术服务有限公司）。芹菜素配制方法：25 mg芹菜素+8 ml生理盐水+40μl DMSO，配成11.6×10-3μmol/L，于4 ℃冰箱保存；溶剂配制方法：8 ml生理盐水+40μl DMSO，配成0.5%的溶剂，4 ℃冰箱保存。

    1.2  仪器  CYES-Ⅱ型氧、二氧化碳气体测定仪；间歇低氧舱和空气模拟对照舱自制（主体由不锈钢制成，舱盖中间部分为玻璃；气体钢瓶、减压阀、流量计、控制程序、继电器、电磁阀、显示器等组成控制系统,间歇低氧舱125 cm×48 cm×24 cm大小，侧壁上有4个进气的单向阀，4个排气的单向阀，空气模拟对照舱大小60 cm×48 cm×24 cm大小，侧壁上有2个进气的单向阀，2个排气的单向阀），电磁阀由宁波亚德客自动化工业有限公司提供，单片机选用台湾华邦（Winbond）的W78E516B八位单片机，压缩氧气(浓度>99.5%)和压缩高纯度氮气(浓度>99.99%)；LKB2088型薄切片机、H-7500型透射电镜，八臂迷宫，迷宫距地面高40 cm，中间八边形平台直径30 cm，向四周以等角度和等长度延伸八条臂(50 cm×12 cm，围以40 cm高的墙，在每个臂的上面有一个强化用的食物杯，直径2 cm，深1 cm)；迷宫用饲饵由浙江大学医学院药理学教研室提供。

    1.3  八臂迷宫试验  在放迷宫的房间四周安放一些明显的视觉标志。训练先将50只幼鼠饿至原体重的85%左右，训练时早晚各给2粒和3粒饲料，在训练过程中保持该体重。然后在迷宫中适应2 d，每天训练一次，适应时2只幼鼠同时置于迷宫中，自由活动和摄取饲饵15 min。每次八臂迷宫的试验时间控制在5 min内，如果超出5 min当作训练不成功，第二天接着训练，每天训练2次，如果在10 d内还不行达到训练成功的标准，就淘汰出试验组。本实验参照Huang YW等[2]方法进行训练。连续5次训练错误选择次数为1次或1次以下，同时WME须为零，认为训练成功，10 d后成功40只。

    1.4  动物模型建立及分组  参照McGuire M、Gozal D等[3，4]方法建立慢性OSAHS动物模型。取迷宫训练成功幼鼠40只，随机分为C组、H组、R组和Q组，每组各10只。H、R、Q组置于常压间歇低氧舱内。90 s为一次低氧-复氧循环，以0.3 kPa压力通氮气30 s、停30 s，25 L/min流量通氧气12 s、停18 s，在停止通气阶段由连接的测氧仪分别测间歇低氧舱内的氧浓度高值、低值和二氧化碳浓度。低氧时氧浓度控制在7.8%左右，复氧时氧浓度控制在21.0%左右，CO2浓度始终<0.01%，湿度为（50±10）%。每天7.5 h(8:50～16:20)。C组幼鼠置于同等条件下的空气模拟对照舱，通压缩空气，与间歇低氧舱由同一单片机程。Q组幼鼠每天于常压低氧30 min腹腔注射25 mg/kg[5]用二甲基亚砜溶解的芹菜素（这个剂量不会影响幼鼠一般的活动能力，可以更客观地评价该药对幼鼠运动行为的影响）。R组则注射同量二甲基亚砜+生理盐水。幼鼠自由活动，不限饮食，实验时间为2周。

    实验过程中，白天各舱上面均盖厚布，使舱内保持黑暗，模拟黑夜，幼鼠进入睡眠状态。每天间歇低氧结束后，幼鼠出舱，置于日光灯下，模拟白天，自由活动，饮食不限。试验结束使幼鼠保持饥饿状态，低氧结束当日迷宫测试，整个测定过程同训练过程一致。

原创作者：安徽耀坤生物科技有限公司