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技术文章
施灸赫依三穴对**模型大鼠行为学及脑组织IL- 6含量的影响
点击次数:109 发布时间:2020/12/17 8:57:50
摘 要:目的:观察施灸赫依三穴对**模型大鼠行为学及脑干组织中IL-6 含量的影响。方法:将60只正常雄性SD 大鼠按体重随机分为6 组,分别为正常组、模型组、安定组、顶会穴组、赫依穴组和黑白际穴组,每组各10只。除正常组外,其余5 组腹腔注射 PCPA 混悬液(1mL/100g),连续注射2 天制造大鼠**模型。成功造模后进行干预:正常组常规喂养;模型组每天抓取固定1次,常规喂养;安定组灌胃安定(***)注射液(0.92mg/kg),每日1次,连续灌胃7天;顶会穴组、赫依穴组和黑白际穴组分别施灸相应的穴位,每日施灸1次,每次5min,连续7天。通过转棒平衡实验和定位航行实验观察比较各组大鼠棒上停留时间和找到平台的时间,并采用 ELISA 法检测大鼠脑干IL-6 的含量。结果:转棒平衡实验:模型组大鼠在转棒上维持时间缩短,与正常组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,安定组、赫依穴组、顶会穴组、黑白际穴组大鼠在转棒上维持的时间显著增加,差异具有统计学意义
(P<0.05);定位航行实验:模型组大鼠找到站台的时间延长,与正常组比较差异具有统计学意义(P< 0.05)。与模型组比较,安定组、赫依穴组、顶会穴组、黑白际穴组大鼠找到站台的时间显著缩短,差异具有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠脑干中IL-6 含量显著高于正常组,差异具有统计学意义(P< 0.05)。与模型组比较,安定组、赫依穴组、顶会穴组、黑白际穴组大鼠脑干中IL-6 含量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:蒙医施灸赫依三穴可降低**大鼠脑干中IL-6含量,从而使大脑兴奋性降低,其机制可能与调节**大鼠脑干中IL-6含量相关。
关键词:**;蒙医灸疗;行为学;白细胞介素-6
随着社会的发展、生活节奏的加快,**成为流行病之 ,其严重影响人们生活质量,可诱发诸多**。蒙医理论 认为**的病因分为外因和内因,外因系劳逸失调、思虑太 过、惊吓、失血等,内因系赫依琪素紊乱累及心脏白脉,大多属“赫依病”范畴。期研究[1-2]已表明,施灸赫依三穴对**模型大鼠有**作用,可降低**神经系统中重要的神经递质———NO 与 NOS的活性。白细胞介素-6(IL-6)是具有多种生物学功能的细胞因子,参与睡眠- 觉醒过程,具有调控睡眠的作用[3]。笔者在期研究的基础上观察施灸赫依三穴对**大鼠行为学变化及脑干内IL-6 含量的影响,探讨其****的作用机制。
1 材料与试药
1.1 实验动物
实验动物选择健康雄性 SD 大鼠60 只,体重约(200± 10)g,全部大鼠均由沈阳实验动物中心 提供,合 格证号:
(SXSK(辽)2015-0001)。
1.2 试剂与仪器
疲劳转棒仪;AUW120D 型岛津电子天平;定位航行试验水槽;Biotek Elx800酶标仪(美Bio-Rad公司);对氯苯丙氨酸(PCPA)( 北京环亚太克生物医学技术有限公司);艾灸贴(苏州东方艾绒厂);IL-6酶联**分析(ELISA)试剂盒(广州瑞博奥生物科技有限公司)。
2 方 法
2.1 造模方法
本实验采用公认的对氯苯丙氨酸(PCPA)造模法制备**大鼠模型[4]。将 PCPA 用生理盐水配制成混悬液( 45mg/100g),除正常组外,其余组大鼠腹腔注射 PCPA 混悬液(1mg/100g),每天1次,连续注射2天。大鼠出现活动明显频繁,对外界的声、光等刺激异常敏感,兴奋性增高,昼伏夜出节律消失等,表明造模成功。
2.2 分组及处理方法
将60只SD 雄性大鼠随机分为6 组,即正常组、模型组、安定组、顶会穴组、赫依穴组、黑白际穴组,每组10只。正常组:大鼠腹腔注射19%氯化钠溶液(1mL/ 100g)
每日1次,连续注射2日;与**组相同的抓取、固定,不做任何**,连续7天。
模型组:造模成功后同灸疗组样抓取,固定。安定组:造 模成功 后,采 用 安 定 (地 西 泮 )注 射 液,0.92mg/kg,每日1次,连续灌胃7天。顶会穴组:造模成功后施灸大鼠顶会穴,每日1 次,连续7天。赫依穴组:造模成功后施灸大鼠赫依穴,每日1 次,连续7天。黑白际穴组:造模成功后施灸大鼠黑白际穴,每日 1 次,连续7天。
2.3 观察指标与检测方法
2.3.1转棒平衡实验[5] 实验装置为单头固定的水平棒。先将疲劳转棒仪调整到训练状态,使各组大鼠适应,再将疲劳转棒仪调到20r/min,当直棒转动时,将大鼠放在转棒上,记录大鼠在转棒上持续不落降的时间,每只大鼠重复测定3次,取平均值。
2.3.2 定位航行实验[6] 实验时向水箱里加入自来水和适量牛奶,使液体与水箱颜色致,水平面高于站台2cm,水温控制在(24±2)℃。实验将各组大鼠放入水箱内自由游泳,若120s未找到站台,人为将其移至到站台上,使大鼠熟悉水箱内环境。测试时将大鼠沿水箱壁轻巧放入水池,记录大鼠找到站台的时间,若大鼠放入水中120s内未找到站台,以120s计。
2.3.3 大鼠脑干中IL-6 含量测定[7] 将6 组大鼠快速断头处死,冰上迅速取大脑干称重,-80℃ 冰箱保存待测。取100mg组织加入500μL 裂解液,冰上裂解30min,每5min振荡1次,在冰上用高速分散切割机进行组织破碎,冷冻离心机离心,13000rpm,20min,取上清液。采用 ELISA 法,按照IL-6试剂盒说明书的步骤,在酶标仪上的540~595nm波长范围内检测吸光度,其中562nm 波长为*佳测量光密度值,计算出IL-6含量。
2.4 统计学方法
所得数据录入SPSS170统计学软件,连续性计量资料以平方差(珚 )表示,数据比较使用独立样本 检验。等数据资料以百分比(%)表示,数据间比较采用卡方检验。P<0.05为差异具有统计学意义。
3 结 果
3.1 各组大鼠转棒平衡实验结果比较
与正常组相比,模型组大鼠在转棒上维持时间缩短,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,安定组、赫依穴组、顶会穴组和黑白际穴组大鼠在转棒上维持时间延长,差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。
3.2 各组大鼠定位航行实验结果比较
与正常组相比,模型组大鼠找到站台的时间延长,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,安定组、赫依穴组、顶会穴组和黑白际穴组大鼠找到站台时间显著缩短, 差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。
3.3 各组大鼠脑干中IL-6含量比较与正常组相比,模型组大鼠脑干IL-6含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,安定组、赫依穴组、顶会穴组和黑白际穴组大鼠脑干IL-6含量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。
4 讨 论
蒙医理论认为人体体素相搏导致无法正常入睡称为**,属于“赫依病”范畴。赫依三穴是指赫依穴、顶会穴、黑白际穴。赫依穴位于第七颈椎棘突与**胸椎棘突间隙窝中;顶会穴位于两耳角直上连线中点,头顶正中心;黑白际穴位于两乳正中对直的心窝处[8]。《甘露四部》[9]中记载:“赫依偏盛引起的**以顶会穴、赫依穴、黑白际穴灸之。
原创作者:安徽耀坤生物科技有限公司