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载体蛋白修饰基团与Pfs48/45-158多肽偶联的制备及应用
点击次数:40 发布时间:2022/2/22 22:13:27
多肽作为一种化合物,也是一类半抗原,缺乏一定的免疫原性,单独的多肽通常太小不足以激起充分的免疫反应,而带抗原表位的载体蛋白有利于刺激辅助性细胞,进一步诱导细胞免疫反应。实验中经常利用多肽修饰基团与载体蛋白制备形成全抗原,其中Pfs48/45抗原多与载体蛋白偶联可以增加多肽的特异性。
载体蛋白修饰马来酰亚胺基团:
用过滤器将溶解载体蛋白(rEPA或BSA)的缓冲液转换乙二胺四乙酸EDTA,并调节蛋白浓度。Sulfo-EMCS粉末溶解,加入载体蛋白液中反应1h,迅速转换缓冲液至PBS-EDTA中,调节蛋白浓度测定载体蛋白上所加的马来酰亚胺基团数量。
Pfs48/45-158多肽制备:
用马来酰亚胺修饰的载体蛋白滴定 Pfs48/45-158多肽,确定量和多肽的摩尔数。用PBS-EDTA配制多肽溶液,在7个反应管中加入等量的多肽溶液,除第1管外,在第2~7管中加入载体蛋白rEPA-M或BSA-M,加入量逐渐递增,在溶液上覆盖氮气后,22℃缓摇反应1h;加入试剂测定As值,检测反应后残余的Pfs48/45-158多肽。
载体蛋白偶联Pfs48/45-158多肽:
根据滴定终点时的体积比,在马来酰亚胺修饰的载体蛋白中加入过量的Pfs48/45-158多肽,覆盖氮气后,缓摇反应1h;对PBS溶液充分透析以去除未反应的Pfs48/45-158多肽。测定偶联后的载体蛋白浓度,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定偶联产物Pfs48/45-158-BSA。
通过载体蛋白修饰马来酰亚胺基团与Pfs48/45-158多肽偶联的制备,PIs48/45-158多肽与载体蛋白的分子特异性结合,使其生物活性增加。PIs48/45-158多肽与载体蛋白偶联还形成全抗原,对临床医学中的疾病起到一定控制免疫作用。这种方法简便易操作,可以使多肽-蛋白偶联产物的质量和稳定性。
除此蛋白偶联外,瑞禧生物还可提供磷脂-PEG偶联多肽,PEG修饰多肽,共聚物修饰多肽,二氧化硅/上转换/量子点修饰多肽,多糖修饰多肽,药物偶联多肽,MOF修饰多肽。
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