SU-DHL-4 人弥漫性大 B 细胞淋巴瘤细胞（STR 鉴定）

细胞特性

细胞背景：1975 年从一名患有 B-NHL（弥漫性大细胞，分裂细胞型；*初描述为“弥漫性组织细胞淋巴瘤”）的 38 岁男性的腹腔积液中建立；细胞系携带 EZH2 Y641S 突变；分配给 GCB 样淋巴瘤亚型（生发中心 B 细胞）。有 14 号、18 号染色体易位。在 BCL-2 基因中有一主要的重排。该细胞系对念珠菌摄入呈阴性。基因表达：IgG+; Kappa+; IgM-; IgA-; IgD-; Lambda-;高表达的 Bax; Bak; AIF; high caspase-9 activity.对 Epstein-Barr 病毒 (EBV) 呈阴性。
https://www.atcc.org/products/crl-2957
https://www.dsmz.de/collection/catalogue/details/culture/ACC-495

1） 来源：淋巴瘤患者胸腔积液 

2） 形态：圆形淋巴细胞单独或成团悬浮生长 

3） 含量：>1x106 细胞数 

4） 规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装 

5) 用途：仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。               

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）  RPMI1640培养基+10%FBS优质胎牛血清+1%P/S双抗

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在 1×105~1×106 个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中 1000rpm，离心 5min，弃去上清，补加1-2mL 培养液后重悬混匀后将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。

二． 细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。